CCK8细胞增殖和活性检测试剂盒-cck8法检测细胞活力- cck8试剂-碧云天生物

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用于生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物的筛选、细胞增值的测定、细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便，试剂盒包含一管已经配制好的含有水溶性四唑的CCK-8溶液，即开即用，无需其他准备步骤。

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CCK-8 细胞增殖与活性检测试剂盒- cck8法检测细胞活力

CCK-8细胞毒性检测试剂盒

货号	规格
BDXB0002-5	5ml
BDXB0002-10	10ml
BDXB0002-30	30ml

产品概述

用途

CCK-8法	MTT法
还原后的甲臜是水溶性的（不需要溶解）	还原后的甲臜是非水溶性的（需要加有机溶剂溶解）
重现性好	重现性差
操作简单	操作繁琐
测定波长：450-490nm	测定波长：550-600nm
单一溶液，即开即用	需要加有机溶剂，有毒性

参考数据

使用方法

一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）

1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2. 按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3. 接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（适用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，尤其加入CCK-8后的培养时间要一致）。

二、细胞活性检测 1. 在96孔板中接种细胞悬液（100μl/孔）。

1.将培养板放在培养箱中预培养（37℃，5% CO2）。

2. 向每孔加入10μl的CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，以免影响OD的读数）。

3. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4. 用酶标仪测定450nm处的吸光度。

5. 如果暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μl的0.1M的HCl溶液或1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光室温保存，24小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增殖-毒性检测（以96孔板为例）

1. 在96孔板中配置100μl的细胞悬液（通常细胞增殖实验每孔加入100μl约2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl约5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定）。按照实验需要，进行预培养。

2. 向培养板加入1-10μl不同浓度的待测药物刺激。

3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（后面有具体细胞的建议时间，例如：6、12、 24或48小时）。

4. 每孔加入10μl的CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，以免影响OD读数）。如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK-8溶液，其他情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

5. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时（对于大多数情况孵育1小时就可以）。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2 和4小时候分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

6. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。

7. 如果暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μl 0.1M的HCl溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光室温保存，24小时内吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化或还原特性，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（先用培养基洗涤细胞两次），去掉药物影响。如果药物影响比较小，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

活力计算

细胞活力*（%）=[A（加药）-A（空白）]/[A（0 加药）-A（空白）] ×100 A

（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度 A

（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度 A

（0 加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

注意事项

1. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

2. CCK-8检测细胞活性原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。任何待测体系中存在还原剂，例一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。

3. 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

4. 建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要查到培养基液面下加样，溶液产生气泡，会干扰OD读数。

5. 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔（100μl培养基）。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500个/孔（100μl培养基），且培养时间长一些。如果要使用24孔板或6孔板实验，需先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

6. 加入CCK-8溶液时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色已变化或pH值变化，建议换用新鲜的培养基。

7. 如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在450-490nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。

8. 酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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