苏州阿尔法生物实验器材有限公司

18年专注生物实验室仪器设备&耗材综合供应

0512-6295610418934597460 /18020269905

实验室耗材 上千款产品 丰富齐全
  • cck8试剂
CCK8细胞增殖和活性检测试剂盒-cck8法检测细胞活力- cck8试剂-碧云天生物

用于生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物的筛选、细胞增值的测定、细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便,试剂盒包含一管已经配制好的含有水溶性四唑的CCK-8溶液,即开即用,无需其他准备步骤。

全国热线

0512-62956104

    CCK-8 细胞增殖与活性检测试剂盒- cck8法检测细胞活力

CCK-8细胞毒性检测试剂盒

    货号 规格
     BDXB0002-5  5ml
     BDXB0002-10  10ml
     BDXB0002-30  30ml

    产品概述

           CCK-8(Cell Counting Kit-8)是一种基于WST(水溶性四唑盐,一种类似于MTT的化合物)的细胞增殖与活性检测试剂盒,用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测。在电子耦合试剂存在的情况下,WST被线粒体内的脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的甲臜染料(formazan),甲臜染料直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快,则培养基的颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,生成甲臜物的数量与活细胞的数量成正比,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
     
    用途
           用于生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物的筛选、细胞增值的测定、细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便,试剂盒包含一管已经配制好的含有水溶性四唑的CCK-8溶液,即开即用,无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲臜,可直接使用96孔板或者384孔板在酶标仪上检测,适合大规模,高通量的样品检测。

    CCK-8与MTT法的比较
    CCK-8法 MTT法
     还原后的甲臜是水溶性的(不需要溶解)  还原后的甲臜是非水溶性的(需要加有机溶剂溶解)
     重现性好  重现性差
     操作简单  操作繁琐
     测定波长:450-490nm  测定波长:550-600nm
     单一溶液,即开即用  需要加有机溶剂,有毒性


    参考数据:

    (1)CCK-8与MTT、XTT、MTS试剂盒比较图
    CCK-8和MTT比较
    (2)博奥龙CCK-8与其它公司产品比较图
    CCK-8细胞活性检测

    使用方法

     一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

     1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

    2. 按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个 细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。 

    3. 接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值,制作出 一条以细胞数量为横坐标,OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未 知样品的细胞数量(适用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,尤其加入CCK-8后的 培养时间要一致)。

    二、细胞活性检测 1. 在96孔板中接种细胞悬液(100μl/孔)。

    1.将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5% CO2)。

    2. 向每孔加入10μl的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,以免影响OD的读数)。 

    3. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 

    4. 用酶标仪测定450nm处的吸光度。 

    5. 如果暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μl的0.1M的HCl溶液或1% w/v SDS溶液, 并遮盖培养板避光室温保存,24小时内吸光度不会发生变化。 

    三、细胞增殖-毒性检测(以96孔板为例) 

    1. 在96孔板中配置100μl的细胞悬液(通常细胞增殖实验每孔加入100μl约2000个细胞,细 胞毒性实验每孔加入100μl约5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的 大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行预培养。 

    2. 向培养板加入1-10μl不同浓度的待测药物刺激。

    3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(后面有具体细胞的建议时间,例如:6、12、 24或48小时)。

    4. 每孔加入10μl的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,以免影响OD读数)。如果起 始的培养体积为200μl,则需加入20μl CCK-8溶液,其他情况以此类推。可以用加了相 应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作空白对照。如果担心所使用的药物 会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作 为空白对照。 

    5. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时(对于大多数情况孵育1小时就可以)。时间的长短根 据细胞的类型和细胞的密度等情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2 和4小时候分别 用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。 

    6. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参 考波长进行双波长测定。 

    7. 如果暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μl 0.1M的HCl溶液或者1% w/v SDS溶液, 并遮盖培养板避光室温保存,24小时内吸光度不会发生变化。 

    注意:如果待测物质有氧化或还原特性,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(先用培养 基洗涤细胞两次),去掉药物影响。如果药物影响比较小,可以不更换培养基,直接扣 除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 

    活力计算

     细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0 加药)-A(空白)] ×100 A

    (加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度 A

    (空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度 A

    (0 加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力 

    注意事项

    1. 由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面, 由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养 液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。 

    2. CCK-8检测细胞活性原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。任何待测体系中存在还原剂,例一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。

    3. 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

     4. 建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时,建议斜贴着培 养板壁加,不要查到培养基液面下加样,溶液产生气泡,会干扰OD读数。

     5. 当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔(100μl培养基)。检测 白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2500个/孔(100μl培养基),且培 养时间长一些。如果要使用24孔板或6孔板实验,需先计算每孔相应的接种量,并按照 每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。 

    6. 加入CCK-8溶液时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色已变化或pH值变化,建议换 用新鲜的培养基。 

    7. 如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在450-490nm之间的滤光片,但是450nm滤 光片的检测灵敏度最高。

    8. 酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过 扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

    9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

公司简介

苏州阿尔法生物实验器材有限公司

18年专注生物实验室仪器设备与耗材供应,一级授权代理国内外16大品牌。

苏州阿尔法生物实验器材有限公司成立于2008年,18年专注生物实验室仪器设备和耗材供应,服务1000+客户,覆盖科研院所、医院、疾控中心及制药与食品检测企业。

主营生物安全柜、超净工作台、振荡培养箱、移液器、PCR仪、凝胶成像、超低温冰箱、液氮罐、高压均质机等仪器设备及耗材试剂,提供选型、配送、安装、维保全流程服务。

18年专注1000+客户16大品牌一级授权一站式采购

免费服务电话

18934597460
18020269905

全国免费服务热线 · 产品咨询 · 选型建议 · 技术支持

订购热线

0512-62956104
  • 邮箱:haiyan_shao@bioalpha.cn
  • 地址:苏州工业园区星湖街218号生物纳米园A5楼301室
代理品牌

国内外16大品牌 · 一级授权代理

点击品牌查看官网对应产品信息。

海尔生物医疗冷藏箱·超低温冰箱·液氮罐·生物安全柜品牌页 ↗
梅特勒托利多-瑞宁手动/电动移液器·助吸器品牌页 ↗
上海知楚振荡培养箱·摇床·生物安全柜品牌页 ↗
杭州朗基梯度PCR仪·荧光定量PCR仪品牌页 ↗
上海天能电泳仪·凝胶成像系统品牌页 ↗
杭州奥盛核酸提取仪·分光光度计·酶标仪品牌页 ↗
ATS Engineering高压均质机·微射流均质机品牌页 ↗
马尔文帕纳科激光粒度仪·纳米粒度电位仪品牌页 ↗
Gator / SOLENTIM分子互作·单细胞铺板品牌页 ↗
耐思NEST离心管·摇瓶·培养板/瓶品牌页 ↗
海星生物血清·培养基·细胞株品牌页 ↗
百时美生物逆转录酶·内切酶·聚合酶品牌页 ↗
天根DNA/RNA提取核酸试剂品牌页 ↗
碧云天生物生命科学试剂·检测试剂盒品牌页 ↗
哈爵雅生物GMP药厂消毒剂品牌页 ↗
德国EKF葡萄糖乳酸·血红蛋白分析仪品牌页 ↗
官方授权原厂直发正品保障选型支持实验室仪器设备与耗材一站式供应
代理哪些品牌?
一级授权代理海尔、梅特勒托利多-瑞宁、知楚、朗基、天能、奥盛、ATS、马尔文、耐思、天根、碧云天等16大品牌。
如何订购?
订购热线 0512-62956104;咨询可拨打 18934597460 / 18020269905。

热品推荐 / Hot product

海尔生物医疗

海尔生物医疗

苏州阿尔法生物与海尔生物医疗建立战略合作伙伴关系。海尔生物医疗是海尔集团旗下生命科学领域核心品牌,专注低温冷链存储设备研发制造。产品覆盖-196℃液氮存储至+8℃冷藏全温区,服务全球100+国家和地区的医院血站、疾控中心、科研院所。
梅特勒-瑞宁

梅特勒-托利多 Rainin瑞宁

苏州阿尔法生物自2014年开始与Rainin建立合作,已累计赢得500+企业对Rainin产品的信赖与认可。Rainin是业内移液解决方案的业内知名供应商,提供范围广泛的人体工程学手动移液器、电动移液器、多通道移液器、BioCleanLTS和通用移液器吸头及专业移液器服务。
上海知楚

上海知楚

苏州阿尔法生物自2013年10月开始与上海知楚建立合作,通过7年的不断努力与拓展,阿尔法生物作为苏州唯一代理商,拥有了一套完善的售后服务体系,阿尔法累计赢得200+企业的对知楚系列的信赖和认可。上海知楚仪器有限公司是多年致力于振荡培养箱的研发、生产和服务的公司。产品系列丰富,有二氧化碳摇床,恒温振荡培养箱,全温振荡培养箱,震荡培养箱,摇床等.
朗基

杭州朗基

苏州阿尔法生物与杭州朗基科学仪器有限公司建立长期战略合作。朗基作为国产PCR仪的先驱品牌,以高精度半导体温控技术、稳定的荧光检测系统,服务全国超过500家科研机构与临床诊断实验室。阿尔法生物作为朗基苏州区域核心代理商,提供从售前选型到售后,从仪器设备到试剂耗材供应的一站式服务。

阿尔法生物产品中心

全国服务热线

0512-62956104