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脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒

脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒产品性能稳定，可提高脂肪间充质干细胞成软骨诱导效率；同时适用于脂肪间充质干细胞平面诱导和三维诱导；该产品属于即用型产品，内含染色液，开封即可使用，简单、快捷、方便。

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脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒

脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒规格： 脂肪间充质干细胞诱导分化成软骨试剂

质检标准 pH：7.2~7.4

内毒素含量：＜10 EU/mL

生物安全：细菌、真菌、支原体检测阴性

质量检测：诱导测试合格

| 检验原理

阿利辛蓝广泛用于酸性多糖的染色，如软骨或组织中的糖胺聚糖和细胞分泌的外被多糖的染色等。干细胞在诱导培养基的作用下，会逐渐向软骨细胞方向分化。软骨细胞外具有一层富含蛋白多糖的基质，是成软骨分化的标志物，可被阿利辛蓝染成蓝绿色。

脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒使用说明

成软骨诱导分化操作（平面诱导）

1. 细胞分化诱导

将对数生长期的细胞消化下来计数，成软骨诱导分化培养基诱导液重悬细胞，离心后调整细胞密度密度1.0~2.0×10e7cells/mL。吸取20 μL细胞悬液（约2.0~4.0×10e5个细胞）悬滴至24孔板中央。置于37℃，5% CO2培养环境下培养2~3 h使细胞贴壁。 2~3 h后补充1 mL成软骨诱导分化培养基诱导液正常培养。每隔2~3天换液一次。按照以上换液频率诱导21~28天，并注意观察细胞形态变化。

2. 染色鉴定

2.1 细胞固定吸去培养基使用适量 1×PBS 清洗一次，弃去后取适量 4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定 30~60 min 后，弃去固定液再使用 1×PBS 清洗两次。

2.2 阿利辛蓝染色向清洗干净的诱导孔内加入适量染色液，避光静置染色 30 min。吸去阿利辛蓝染色液，用 1×PBS 清洗两次，并加入适量 1×PBS 避免细胞干燥。

2.3 诱导评估显微镜下观察成软骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，软骨组织中的内酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。

成软骨诱导分化操作（三维培养）

1. 干细胞的准备

将对数生长期的细胞消化下来计数，取 3×10e5 个细胞转移到 15 mL 离心管中，250 g 离心 4 min。弃上清，加入 0.5 mL 成软骨诱导分化培养基预混液，重悬细胞，150 g 离心 5 min。小心弃去上清，加入 0.5 mL 成软骨诱导分化培养基诱导液，重悬细胞，150 g 离心 5 min。将 15 mL 离心管的管盖稍稍旋开，放置于 37℃，5% CO2培养环境下培养。

2. 细胞分化诱导

24 h 后观察细胞沉淀形变团聚的情况，如有明显的变化，则小心轻柔地拨动管底，尝试让细胞团脱离管底，全部浸润在诱导液中。置于 37℃，5% CO2培养环境下培养约 21 天，通常每 2 天更换一次新鲜配制的成软骨诱导分化培养基诱导液。注意观察细胞团成球情况及表面光滑度，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

3. 染色鉴定

3.1 软骨球固定将软骨球从离心管中转移至 EP 管，并使用 1 ×PBS 清洗两次，最后置于适量的 4%中性甲醛溶液中。

3.2 石蜡包埋切片软骨球经石蜡包埋后切片。

3.3 阿利辛蓝染色将石蜡切片脱蜡和脱水，使用阿利辛蓝染色液染色 30 min，用自来水冲洗 2 min，蒸馏水冲洗 1 次。

3.4 诱导评估显微镜下观察成软骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，软骨组织中的内酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。

脂肪间充质干细胞诱导成软骨

NOTE: 干细胞的成软骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。

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苏州阿尔法生物实验器材有限公司

18年专注生物实验室仪器设备与耗材供应，一级授权代理国内外16大品牌。

苏州阿尔法生物实验器材有限公司成立于2008年，18年专注生物实验室仪器设备和耗材供应，服务1000+客户，覆盖科研院所、医院、疾控中心及制药与食品检测企业。

主营生物安全柜、超净工作台、振荡培养箱、移液器、PCR仪、凝胶成像、超低温冰箱、液氮罐、高压均质机等仪器设备及耗材试剂，提供选型、配送、安装、维保全流程服务。

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