细胞转染-QuickShuttle-Enhanced-转染试剂增强型

货号：KX0110042 

含量：0.8 ml 

用途：

（1）用于大多数哺乳动物贴壁细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建； 

（2）用于难转哺乳动物细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建。

 注意事项：

 1. 质粒 DNA：请用能够去除内毒素的方法制备高质量的质粒 DNA。

 2. 稀释液：0.85%（W/V）生理盐水，用低内毒素纯水配制，高压消毒或除菌过滤。

 3. 培养基：经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试，推荐使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若转染效果不理想可尝试其它培养基。

 4. 以 24 孔细胞板转染实验为例，推荐每孔低内毒素质粒 DNA 用量为 1~2µg、转染试剂用量为 3~5µl， 请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化。

 5. 如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系，可在细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染，从而可节省 18~24 小时的转染前细胞培养时间。 使用方法：

 1. 转染前 18~24 小时接种细胞到 24 孔细胞板中，每孔 5~10×104细胞，1ml 完全培养基。

备注：如果筛 选抗药性稳定细胞系，可以考虑简化的实验步骤，即在细胞传代后直接按下述步骤 2~5 进行转染，无 需 18~24 小时的等候时间。

 2. 将 1~2μg 质粒 DNA 和 3~5μl 转染试剂分别稀释到 50μl 生理盐水中。

备注：质粒 DNA 和转染试剂的 最适用量需要根据不同细胞和不同培养基来优化，但理论上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范围。 

3. 合并上述两溶液并混匀。备注：无需其它转染试剂所需的 10~30 分钟的等候时间。 

4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。

备注：转染复合物可直接 加入含血清的细胞培养基中进行转染。在极少情况下会出现贴壁细胞脱落现象，可先从待转染细胞孔中吸取 500µl 培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。若在细胞瓶中进行转染，直接加入到无细胞 贴壁的对面或侧面并摇匀即可。

 5. 将细胞板移至 37ºC/5% CO2 孵箱中进行培养。备注：无需在转染后 4~6 小时补加血清或更换培养 基。

 6. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。