NK细胞分选试剂盒可用于从小鼠脾脏单细胞悬液中分离未经标记的NK 细胞。非NK细胞(T细胞、DC 细胞、B细胞、粒细胞、巨噬细胞、红系细胞)被生物素化的抗体和识别生物素的磁珠标记通过去除这些非NK细胞，从而得到高纯度的NK细胞。

其分选原理为：用生物素结合的单克隆抗体混合物(作为一级标记试剂)和与磁珠结合的抗生物素单克隆抗体(作为二级标记试剂)对非靶细胞进行间接磁性标记。磁性标记的非目标细胞在分选器的磁场中被保留在分选柱中，而未标记的NK 细胞则通过分选柱流出。

试剂和仪器要求

缓冲液（pH7.2 PBS，0.5% BSA、2mM EDTA， 2~8℃）

分选柱和分选器。

(可选)荧光偶联的抗体用于流式分析。

(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。

(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。

(可选)预分离过滤器去除细胞团块。

操作步骤

一、样本准备

使用手动方法或组织解离器制备脾脏单细胞悬液。

二、磁珠标记

1.细胞计数。

2.300xg离心10分钟。去除上清。

3.每107个细胞总量使用 40μL缓冲液重悬。

4.每107个细胞总量添加 10μLNK细胞生物素抗体混合物。

5.混匀，2-8℃孵育  5分钟。

6.每107个细胞加入 2mL缓冲液洗涤细胞，300xg离心10分钟，去上清。

7.每107个细胞添加 80μL 缓冲液。

8.每107个细胞添加 20μL抗生物素磁珠。

9.混匀，2-8℃孵育 10分钟。

10.(可选)添加染色抗体。

11.进行细胞分选步骤。

三、细胞分选

xM或xL分选柱进行细胞分选

1.将分选柱置于相对应的分选器中。

2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM: 500 μL； xL: 3mL）

3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集含有未标记细胞的流出液，即 NK细胞。

4.加适量的缓冲液，收集总流出物，并与步骤 3中的流出液混合，这是NK细胞。（ xM: 500 μL；xL: 3mL）

5.(可选 )将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的非NK细胞。（ xM: 1mL；xL: 5mL）

储存温度

2-8℃避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。

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