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LightNing AccI内切酶-快速限制性内切酶
产品货号： EG15502S
产品规格： 50 rxns
同裂酶： XmiI, FblI
识别位点： GTMKAC5'...G T ↓ M K A C...3'3'...C A K M ↑ T G...5'
LightNing AccI内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有 LightNing® 快速内切酶在通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具有优良的活性，能够在 5~15 分钟内完成酶切。
组分 |
规格 |
|
LightNing® AccI |
50 μl |
|
10× CutOne® Buffer |
1 ml |
|
10× CutOne® Color Buffer |
1 ml |
Q:为什么在 CutOne® Buffer 中加入HSA ？
A:一些酶在反应过程中需要 HSA 的参与，我们在CutOne® Buffer 中添加了 HSA ，避免反应中额外添加组分，使得酶切反应更加便捷 。
Q:HSA的添加对于雷霆系列限制性内切酶的功能会产生什么样的影响？
A:在我们的测试中未曾发现 HSA 对于雷霆系列限制性内切酶的功能有任何影响。在有些情况下，对于部分的酶切反应有促进作用。
Q:我需要严格遵守 5~15 min 的酶切时间吗？能够延长反应时间吗？
A:雷霆系列限制性内切酶经过改造可以将酶切时间缩短至 5~15 min 。同样也消除了限制性内切酶的星活性（长时间反应造成的非特异性消化），在说明书中告知的星活性出现的时间范围内可以适当延长反应时间。
Q:我什么时候应当考虑星活性对于酶切反应的影响？
A:如果额外的酶切条带对于实验结果会产生影响时我们应当考虑星活性对于酶切反应的影响。例如：进行基因型、突变型分析或克隆时我们应当避免星活性的产生。避免星活性的有效方法：适当扩大反应体积（较小的反应体积容易造成甘油体积达到或超过总反应体积的 5%）；不进行超长时间孵育（过夜消化极易产生星活性）。
Q:有哪些关键因素会导致星活性？
A:长时间孵育、过量的酶、高甘油含量（通常高于 5% ）、较小的反应体系等因素都会导致星活性的产生。
Q:未经纯化的 PCR 产物直接酶切要怎样设定体系？
A:反应体系推荐由这些内容组成： 10 μl PCR 产物、 2 μ l 10 × CutOneTM Buffer 、 1~2 μ l 相应的限制性内切酶、 ddH2O 补齐到 30 μ l 。酶的用量根据 PCR产物的浓度而定，只加入 2 μ l 反应缓冲液的原因是 PCR 反应中存在对应的盐离子和金属离子，适当减少反应缓冲液的用量以保证最终反应体系中的环境适宜限制性内切酶发挥功能。
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