天根DNA纯化试剂盒-DP205

天根DNA纯化试剂盒-DP205产品简介

  天根DNA纯化试剂盒-DP205试剂盒采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段，同时除去蛋 白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收100 bp-10 kb DNA片段， 回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为20 μg。 使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、 连接和转化等实验。

 产品特点 快速：整个操作过程只需十几分钟，节省时间。

 多样：可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。

 高效：离心柱和缓冲液可大量回收到高纯度目的DNA。

1．本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有DNA片段（可去除50 bp以下的小片段），如 需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择胶回收试剂盒。

2．洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定：如回收前DNA只有1-5 μg左右，则应选用 超薄型离心柱，加20-50 μl洗脱缓冲液；回收前为5-20 μg左右的DNA，应选用普通型离 心柱，加30-100 μl洗脱缓冲液；如回收前有20-30 μg左右DNA，则应选用大量型离心 柱，加50-300 μl洗脱缓冲液。

3．回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。

4．对于10 kb的DNA片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间

5．平衡液BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温 /潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。使用前请先检查平衡液BL是否出现浑 浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

6．用平衡液处理过的柱子应当天使用，放置时间过长会影响效果。 

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项

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天根DNA纯化试剂盒-DP205操作步骤

 使用前请在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1. 柱平衡步骤：向吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl的平衡液BL，12,000 rpm (~13,400×g) 离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用 当天处理过的柱子）

2. 估计PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入5倍体积的结合液PB，充分混匀（无 需去除石蜡油或矿物油）。 注意：如PCR反应体系为100 μl（不包括石蜡油体积）, 则加入500 μl结合液PB。

3. 将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），室温放置2 min， 12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集 管中。 注意：吸附柱容积为800 μl，若样品体积大于800 μl可分批加入。

4. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 注意：如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW 加入后静置2-5 min再离心。

5. 重复操作步骤4。

6. 将离心吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，尽量除去漂洗 液。将吸附柱置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实 验。 注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验

7. 取出吸附柱CB3放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液 EB，室温放置2 min。12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，收集DNA溶液。 注意：洗脱液的体积不应少于50 μl，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗 脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范 围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。DNA 也可以用缓冲液(10 mM Tris-Cl, pH8.0) 洗脱。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的 溶液重新加回离心吸附柱中，再次离心。

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 DNA浓度及纯度检测 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml 单链DNA。 OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏 低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。