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  • DP504
天根试剂盒- 多糖多酚植物miRNA提取试剂盒-DP504
天根miRcute多糖多酚植物miRNA提取分离试剂盒 DP504可从植物组织,特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织(如棉花叶片,马铃薯块茎,苹果,桃树叶片等)中快速提取包含miRNA的总RNA,可同时处理大量不同样品。提取的总RNA纯度高,没有蛋白和其它杂质的污染。
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天根miRcute多糖多酚植物miRNA提取分离试剂盒 DP504

DP504

产品简介

多糖多酚植物miRNA提取分离试剂盒可从植物组织,特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织(如棉花叶片,马铃薯块茎,苹果,桃树叶片等)中快速提取包含miRNA的总RNA,可同时处理大量不同样品。提取的总RNA纯度高,没有蛋白和其它杂质的污染。

产品特点
裂解液特别优化,并配有助沉剂,专为多糖多酚植物样 本的裂解设计,得率高。
柱法纯化,摆脱杂质污染,纯度更高,适合下游定量检测。 
功能全面,除了小片段的提取,还能进行总 RNA 的提取。
1 h内即可提取完毕,提高提取效率。

下游应用
可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。

操作步骤:

 使用前在漂洗液RWA和去蛋白液MRD中加入C₂H₆O,加入量请参见瓶上标 签。 

一、miRNA富集部分的提取 对miRNA的纯度要求较高时,比如miRNA芯片研究、miRNA克隆建议采用此方法。 

1.匀浆处理 50 mg植物叶片或果实果肉在液氮中迅速研磨成粉末,转入到1.5 ml离心管中,加入500 μl裂解液SLM,颠倒混匀以保证裂解液浸没所 有样本,再加入1/10裂解液体积的助沉剂PLA,立即涡旋震荡混匀。

 注意 1:对于预期RNA得率小于10 μg的植物样本,请使用100 mg的起始样本量;对于富 含淀粉的样本或成熟叶片,请将裂解液SLM用量增加至700 μl。 

注意 2:由于植物多样性非常丰富,而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织RNA含 量都不相同,请根据具体实验情况选择合适的样本量。 

2.室温,12,000 rpm(~13,400×g) 离心5 min。

 3.将上清液转移至过滤柱CS上(过滤柱CS放在收集管中),室温12,000 rpm(~13,400×g) 离 心2 min,小心吸取收集管中的上清至新的RNase-Free的离心管中,吸头尽量避免接触收 集管中的细胞碎片沉淀。 

4. 量取转移液的体积,缓慢加入转移液体积0.43倍的C₂H₆O, 混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱 miRspin中,室温 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec。若一次不能全部加入到吸附柱 miRspin中,请分两次转入,离心后弃掉吸附柱miRspin,保留流出液。

 5. 量取流出液的体积,缓慢加入流出液体积0.75倍的C₂H₆O,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR4 中,室温 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,若一次不能全部加入到吸附柱CR4中, 请分两次转入,离心后弃掉流出液,保留吸附柱CR4。

6. 向吸附柱CR4中加入700 μl去蛋白液MRD,室温静置2 min,室温 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,弃废液。

 7. 向吸附柱CR4中加入500 μl漂洗液RWA(请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min, 室温 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,弃废液。

 8. 重复操作步骤7。 

9. 将吸附柱CR4放入2 ml收集管中,室温 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min,去除残余液 体。

 注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱CR4在室温放置2 min,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续 的RT等实验操作。

10. 将吸附柱CR4转入一个新的RNase-Free 1.5 ml离心管中,加50 μl RNase-Free ddH2O, 室温放置2 min,室温 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。

 注意:洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃, 以防降解。

注意:如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次。

二、 Total RNA的提取 提取的total RNA中含有miRNA等small RNA。

对miRNA的纯度要求不高时,比如在研 究miRNA RT-PCR、miRNA Northern blot时也可以采用此方法。

1. 匀浆处理 50 mg植物叶片或果实果肉在液氮中迅速研磨成粉末,转入到1.5 ml离心管中,加入500 μl裂解液SLM ,颠倒混匀以保证裂解液浸没所有 样本,再加入1/10裂解液体积的助沉剂PLA ,立即涡旋震荡混匀。

 注意1:对于预期RNA得率小于10 μg的植物样本,请使用100 mg的起始样本量;对于富 含淀粉的样本或成熟叶片,请将裂解液SLM用量增加至700 μl。

 注意2:由于植物多样性非常丰富,而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA 含量都不相同,请根据具体实验情况选择合适的样本量。

 2. 室温,12,000 rpm(~13,400×g) 离心5 min。

 3. 将上清液转移至过滤柱CS上(过滤柱CS放在收集管中),12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,小心吸取收集管中的上清至新的RNase-Free的离心管中,吸头尽量避免接触收集 管中的细胞碎片沉淀。

 4.缓慢加入1.5倍上清体积的C₂H₆O,混匀(此时可能会出现沉淀),将得到的溶液和 沉淀一起转入吸附柱CR4中, 12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec,倒掉收集管中的废 液,将吸附柱CR4放回收集管中。

若一次不能全部转入吸附柱CR4 ,请分两步进行。 注意:如果上清液体积有损失,请相应调整无水乙醇的加量。 

5.向吸附柱CR4中加入700 μl去蛋白液MRD(使用前请检查是否已加入乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR4放回收集管中。

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