细胞培养缓冲液有哪些？

一、细胞培养使用的碳酸氢钠

碳酸氢钠（NaHCO3）是细胞培养中常用的缓冲液，用于在4–10%二氧化碳存在的情况下维持培养基的 pH 值。此外，碳酸氢钠提供一些营养价值，且很少对细胞有毒。

培养基中碳酸氢钠的最终浓度取决于培养基的配方和培养箱的二氧化碳浓度。根据所用碳酸氢钠的浓度，建议使用不同的 CO2 浓度。如果培养基配方包括：

NaHCO3（g/L）<1.5，需要浓度为4%的 CO2

NaHCO3（g/L）1.5–2.2，需要浓度为5%的 CO2

NaHCO3（g/L）2.2–3.4，需要浓度为7%的 CO2

NaHCO3（g/L）>3.5，需要浓度为10%的 CO2

二、细胞培养中使用的 HEPES 缓冲液

尽管碳酸氢盐因其营养价值而成为最常用的细胞培养缓冲液，但与 HEPES 缓冲液相比，碳酸氢盐的缓冲能力在生理 pH 值时有所下降。HEPES 对细胞没有营养价值，但可以添加到 pH 7.2 至 7.6 的缓冲细胞培养基中。因此，当需要在 CO2 培养箱外长时间处理细胞培养物时，添加 HEPES 可提供额外的缓冲能力。

Gibco HEPES（4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸）是一种两性离子性的有机化学缓冲剂，被归类为" Good "缓冲液，源于 Norman Good 博士和他的同事在1966年发现的一组缓冲液（Good 等人，Biochemistry 1966）。

"Good 缓冲液"（如 HEPES）具有以下特征：

l pKa 值在6.0至8.0之间

l 高溶解度

l 膜不通透性

l 对生化反应的影响有限

l 较低的可见光和紫外光吸收率

l 化学和酶促稳定性

l 易于制备

细胞培养基中 HEPES 的水平可以从 10 mM 到 25 mM 不等。在 Gibco DMEM 中，HEPES 的浓度为 25 mM。然而，在 Gibco MEM/F12 中，其浓度为 15 mM。常用的浓度为 25 mM。

三、其他细胞培养添加剂

1.  2-巯基乙醇

广泛应用的化合物2 -巯基乙醇的分子式为 HOCH2CH2SH。它是乙二醇的混合物，用于还原二硫键。它能够清除羟基自由基（等），可作为生物抗氧化剂。羟基可溶于水并可降低挥发性。

2.氨基酸溶液

要增加培养细胞的活性并刺激生长，可向培养基中添加氨基酸添加剂。此外，添加氨基酸添加剂可提供营养并减轻 体外细胞的生物合成负担。 在蒸馏水中制备，该溶液中的非必需氨基酸浓度是 MEM-α 培养基中浓度的100倍。

3. HAT 添加剂

HAT 添加剂是次黄嘌呤钠、氨基蝶呤和胸苷的液体混合物。稀释后的 HAT 适合用作融合后选择培养基，以去除未融合或自融合的 HGPRT-骨髓瘤细胞。 次黄嘌呤和胸苷通过利用 HGPRT 的补救途径（由融合的脾细胞提供）为杂交瘤的 DNA 合成提供预制嘌呤和嘧啶。 叶酸拮抗剂、氨基喋呤抑制 从头 核苷生物合成途径。

4. MEM 维生素溶液

向培养基中添加 MEM 维生素溶液可增强培养中的细胞生长和活力，并减少体外细胞的生物合成负担。在0.85%的盐水中制备而成，该溶液中的维生素浓度是标准 MEM 培养基中浓度的100倍。

5.丙酮酸钠

丙酮酸钠通常作为额外的碳来源补充到细胞培养基中。用于细胞培养的 Gibco 丙酮酸钠以100 mM（100倍）溶液的形式提供，最终浓度为 11,004 mg/L。

6.植物凝集素

植物凝集素是由红腰豆菜豆粗提取物制成的溶液。当以一定浓度应用时，这种添加剂可以在体外诱导各种哺乳动物单核细胞中的芽基发育。

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