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类器官包埋产品通过优化基质特性、简化操作流程和提升实验兼容性,提升了实验效率。以 SE-Gel为例,其设计围绕 “高效保护、快速处理、精准应用 ” 三大核心目标,结合以下机制与技巧实现实验效率的突破:
仿生保护,减少操作损伤
SE-Gel 采用生物相容性水凝胶替代传统冻存液,在低温环境中形成多孔保护基质,显著减少冰晶对类器官的物理损伤。实验数据显示,使用 SE-Gel 冻存的类器官复苏后存活率可达 80%,且组织结构与功能活性(如分泌因子、药物响应)保持率达 90%。这一特性避免了传统基质胶依赖导致的酶解损伤(传统方法细胞凋亡率高达 30%-50%),使传代周期从 7-10 天缩短至 4-5 天,连续传代次数从≤5 代提升至≥15 代。
极简流程,适配高通量需求
SE-Gel 为即用型预配胶液,无需加热溶解或复杂浓度调配,直接从 2-8℃取出冰上平衡后即可使用。单个样本包埋耗时<5 分钟,1 小时内可完成 10-50 例样本处理,支持多孔板或芯片的高通量操作。例如,配合济研生物的 CSwell600 高通量 3D 培养芯片,可实现鼠源类器官悬浮培养,无需基质胶包埋,传代时直接收集细胞球,避免酶解步骤,细胞存活率提升至 90% 以上。
多场景兼容,降低实验成本
SE-Gel 兼容石蜡与冰冻切片,包埋后的类器官可直接进行下游分析。其天然抗冻成分可减少冰冻切片时的冰晶形成,使类器官形态完整度提升至 95% 以上,避免了传统方法中因结构破坏导致的重复实验。此外,SE-Gel 冻存液可在 - 20℃稳定保存 3 个月,多次冻融不影响性能,单例综合成本较传统方法降低 50% 以上。
精准包埋
1. 冻存前将类器官离心(100g,5 分钟),弃上清后加入适量 SE-Gel,轻柔吹打使细胞团均匀分散。建议包埋体积控制在 10-50μL,仅需 10-100 个细胞团即可完成操作,减少珍贵样本浪费。
2. 采用程序降温法:将包埋后的样本置于 - 80℃冰箱(梯度降温:-20℃ 1 小时→-80℃过夜),次日转移至液氮长期保存,避免反复冻融导致的活性损失。
快速复苏
1. 从液氮中取出冻存管后,立即置于 37℃水浴快速解冻(≤2 分钟),期间轻柔晃动加速融化。
2. 复苏后直接离心(100g,5 分钟)去除 SE-Gel,加入预温的专用培养基重悬,可直接用于单细胞测序、药敏检测等下游实验,无需额外清洗或平衡步骤。
冰上操作与预染色定位
1. 全程保持 SE-Gel 冰上处理,避免基质成分因温度升高而变性。可在包埋前向 SE-Gel 中加入配套染色液(蓝色或红色),使胶滴在体视显微镜下清晰可见,切片时修片误差<50μm,显著提升定位精度。
适配不同切片需求
1. 石蜡切片:包埋后的类器官可直接进行石蜡包埋,无需二次处理。SE-Gel 的柔性基质可避免切片时的结构塌陷,适合长期保存蜡块。
2. 冰冻切片:使用 OCT 包埋时,SE-Gel 的抗冻成分可减少冰晶形成,建议在 - 20℃冷冻 30 分钟后切片,保持类器官形态完整度。
培养基协同优化
SE-Gel 与济研生物的鼠源类器官专用培养基(含鼠源性 Wnt3a、RSPO1 等因子)配合使用时,可将传代后细胞倍增时间缩短至 24-36 小时(传统培养基需 48-72 小时),同时维持隐窝 - 绒毛等复杂结构。建议根据类器官类型选择配套培养基,例如胃类器官需额外添加前列腺素 E2,肝类器官需补充 HGF。
自动化设备适配
在高通量实验中,可通过移液工作站将 SE-Gel 精确分配至 96 孔板,配合 CSwell600 芯片实现类器官悬浮培养。该芯片的纳米级亲水涂层微孔板支持自动化换液和成像,实验周期较传统方法缩短 40%。
批次验证与稳定性测试
新批次 SE-Gel 使用前需进行预实验验证:取少量类器官冻存后复苏,通过台盼蓝染色检测存活率(应>80%),并通过免疫荧光染色观察标志物(如肠类器官的 Lgr5、肝类器官的 Albumin)表达情况。
规范存储与使用
1. 未开封的 SE-Gel 应于 2-8℃避光保存,避免冷冻。
2. 溶解后的胶液可在 - 20℃分装保存 3 个月,每次使用前于冰上解冻,避免反复冻融。
3. 避免与其他品牌基质胶混用,防止成分干扰导致凝胶异常。
维度 |
SE-Gel |
传统琼脂糖 |
Matrigel |
操作时间 |
冻存 / 复苏≤30 分钟,包埋≤5 分钟 / 样本 |
需 2 小时以上溶解 + 30 分钟凝固,单样本处理耗时>15 分钟 |
需冰上操作 + 30 分钟凝胶化,传代时酶解需额外 30-60 分钟 |
细胞存活率 |
复苏后存活率 80%,结构完整率 88% |
冰冻切片后结构完整率<70% |
传代后存活率 55%±5%,连续传代≤5 代 |
兼容性 |
兼容石蜡 / 冰冻切片、单细胞测序、药敏检测 |
仅适配石蜡切片,冰冻切片冰晶损伤严重 |
需二次处理以去除基质胶,影响下游分析 |
成本效益 |
单例综合成本降低 50%,支持高通量操作 |
耗材 + 设备成本高,样本浪费率>30% |
批次差异大,需频繁优化浓度,长期成本高 |
肿瘤类器官药敏筛选
使用 SE-Gel 冻存的肿瘤类器官复苏后,可直接接种于 96 孔板进行药物梯度测试。其稳定的三维结构可更真实反映肿瘤微环境,药敏结果与响应一致性达 75% 以上。
发育生物学研究
配合 SE-Gel 的动态模量可调特性(1-100kPa),可模拟不同组织力学环境。例如,脑类器官在低模量(<10kPa)SE-Gel 中培养时,神经突生长长度较 Matrigel 增加 3 倍,突触形成效率提升 50%。
微生物 - 宿主互作研究
SE-Gel 的多孔结构允许细菌定植,可将肠道类器官与益生菌共培养,通过荧光标记观察细菌黏附与宿主免疫反应,实验周期较传统 Transwell 模型缩短 40%。
通过上述机制与技巧,SE-Gel 在类器官培养、冻存、分析的全流程中实现了效率与可靠性的双重突破,尤其适用于高通量筛选、长期模型构建及转化研究。建议根据实验需求选择配套试剂(如培养基、消化液),并严格遵循操作规范以充分发挥其性能优势。
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