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可穿透性细胞培养小室作为模拟体内细胞间动态交流的核心工具，凭借其底部多孔滤膜的 “物理分隔 - 分子穿透” 特性，成为肿瘤微环境研究、干细胞旁分泌调控、免疫细胞杀伤效应验证等领域的必备设备。
一、两类特定实验操作流程
（一）Caco-2细胞药物转运实验（模拟肠道吸收）
Caco-2细胞是肠道上皮细胞模型，需用Transwell小室构建单层屏障，检测药物从“肠道腔侧” （上室）到“血液侧”（下室）的渗透率，核心是保证细胞单层完整性。
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步骤 |
操作细节 |
关键注意事项 |
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1. 小室准备 |
选择0.4μm孔径PC膜Transwell小室（6
孔板），用无血清DMEM浸泡膜30分钟。 |
膜需完全浸润，避免残留气泡影响细胞贴壁。 |
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2. 细胞铺板 |
Caco-2细胞（对数期）用含10%胎牛血清的DMEM重悬，上室接种1×10⁵ cells/孔。 |
铺板后轻轻摇晃培养板，确保细胞均匀分布在膜上。 |
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3. 单层培养 |
37℃、5%CO₂培养21天，每2 天更换上、下室培养基（下室培养基量是上室的2倍）。 |
培养第14天起，每天用电阻仪测TEER值（>500 Ω·cm² 表示单层完整，可开始实验）。 |
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4. 药物加样 |
弃去旧培养基，上室加含药物的无血清DMEM（如10μM药物），下室加等量无血清 DMEM 。 |
药物需用培养基充分溶解，避免沉淀。 |
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5. 取样检测 |
分别在0.5、1、2、 4小时取上、下室样品，用HPLC或LC-MS测药物浓度，计算渗透率（ Papp值）。 |
取样后需补加等量新鲜培养基，维持体系体积稳定。 |
（二）干细胞与内皮细胞共培养实验（模拟血管生成）
常用Millicell®小室构建“干细胞-内皮细胞 ”互作模型，分间接共培养（仅分子交换）和直接共培养（细胞可接触），适配不同研究目的。
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步骤 |
间接共培养（0.4μm孔径膜） |
直接共培养（3.0μm孔径膜） |
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1. 小室选择 |
Millicell®悬挂式小室，0.4μm PET膜（阻止细胞穿过，仅允许因子交换）。 |
Millicell®站立式小室，3.0μm PC膜（允许细胞突起接触）。 |
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2. 细胞接种 |
上室接种干细胞（如间充质干细胞，5×10³ cells/cm²），下室接种内皮细胞（如HUVEC，1×10⁴ cells/cm² ）。 |
上室接种内皮细胞，下室接种干细胞，共用“干细胞培养基:内皮细胞培养基 =1:1” 的混合培养基。 |
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3. 共培养维护 |
每3天更换下室培养基（上室培养基量仅覆盖膜表面，避免淹没细胞）。 |
每天观察细胞形态，共培养7天（内皮细胞会形成管腔样结构）。 |
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4. 结果检测 |
收集下室培养基，用ELISA测血管生成因子（如VEGF）浓度；或免疫荧光染干细胞标志物（如CD90 ）。 |
用荧光染料（如Dil-Ac-LDL）染内皮细胞，显微镜下计数管腔数量和长度。 |
二、细胞共培养小室的核心参数对比
市场上以Corning（Transwell）、NEST（国产高性价比）、 Millipore（Millicell®原厂）为主，三者在膜材质、适配场景、价格上差异较大，可按需选择。
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品牌 |
核心产品 |
膜材质选项 |
常用孔径（μm） |
适配培养板规格 |
优势场景 |
价格区间提示 |
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Corning |
Transwell®小室 |
PC、PET、FluoroBlok™遮光PET |
0.4、3.0、8.0 |
6/12/24/96孔 |
肿瘤侵袭、Caco-2药物转运（品质稳定，数据重复性高） |
偏高（单盒6孔约300-500元） |
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NEST |
耐思Transwell小室 |
PC、PET |
0.4、3.0、8.0 |
6/12/24孔 |
基础共培养、教学实验（性价比高，适配国产培养板） |
偏低（单盒6孔约100-200元） |
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Millipore |
Millicell®小室 |
PC、PET、PTFE |
0.4、3.0、5.0 |
6/12孔（专用板） |
类器官气液界面培养、干细胞分化（三维培养效果优） |
偏高（单盒6孔约400-600元） |
苏州阿尔法生物实验器材有限公司成立于2008年，位于苏州园区生物纳米园（Biobay）A5幢301室。公司管理团队专注于科学仪器行业十四年，拥有专业的技术团队与完善的售后服务体系，目前已为300余家实验室提供优质产品和服务，涵盖各大高校、检测中心、科研机构、制药企业等13个群体。提供的实验室仪器主要包括振荡培养箱，恒温恒湿培养箱、二氧化碳培养箱、生化培养箱、霉菌培养箱、PCR仪，瑞宁移液器，生物反应器，发酵罐，超低温冰箱，液氮罐，高压灭菌器，超纯水机，天平，离心机，离心浓缩仪、研磨机、葡萄糖乳酸分析仪等。厂商企业授权包括知楚仪器、朗基、中科美菱，梅特勒，乐枫，搏旅、NEST、天根、奥盛在内的80个余厂家。
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