CHO细胞（ChineseHamsterOvarycells）是一种常用于重组蛋白生产的哺乳动物细胞系，而采用生物反应器补料分批培养技术（Fed-Batch）则是一种重要的工艺方法，用于优化CHO细胞中重组蛋白的生产。本文将介绍CHO细胞的优势、补料分批培养的特点和影响因素，以及不同营养物质对细胞生长和目的蛋白表达的影响。

  近 80% 的CAR-T抗体由中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞产生。为了实现更好的细胞生长和高产重组蛋白，补料分批培养通常用于在 CHO 细胞中生产重组蛋白。根据营养物质消耗的需要，在细胞培养中加入含有多种成分的补料培养基，可以影响细胞生长特性，提高重组蛋白的产量和质量。补料分批优化应与 细胞培养环境参数、培养基 组成、补料策略等综合因素相 关联。

  乳酸是CHO细胞补料分批培养的主要副产品之一。在pH控制的生物反应器中，由于添加碱以控制细胞培养基的pH值，高水平乳酸的积累伴随着高渗透压，可能导致制造细胞生长缓慢，甚至大量凋亡，同时产生抗体蛋白的产量也降低不少。

培养参数会影响 CHO 细胞生长、重组蛋白表达、蛋白糖基化、细胞代谢物和其他因素。生物反应器设计用于在 CHO 细胞中培养用于 RTP 生产的悬浮培养物。细胞通过CO2振荡摇床、摇瓶、滚瓶扩增后，接种在生物反应器中进行传代生长。对于补料分批培养，生物反应器中的培养环境参数通常通过实验设计 (DoE) 或一次单因素 (OFAT) 研究进行优化，这些优化包括温度、溶解氧 (DO)、渗透压和 pH值等。

CHO细胞是一种广泛用于生物制药蛋白质生产的宿主。CHO细胞中分离外泌体主要采用聚合物的沉淀(PBP)技术从分批培养中分离和富集细胞外泌体囊泡。分离后的外泌体可以通过多种方法来检测和表征分离的囊泡，这些分析包括动态光散射(DLS)和Zeta电位测量、电子显微镜(EM)和外泌体标记物分析、RNA和脂质分析等。

流加培养和分批培养的原理及应用如下：在补料分批培养中，在无菌条件下添加营养；它是一个半开放系统，生物反应器中液体培养物的体积随着培养物的系统添加而增加。补料分批培养的生产力更高，通过可控的顺序添加营养物产量更高，能够实现更高的细胞密度，并延长产品合成时间。

随着生物制药工艺的不断发展，蛋白类药物、抗体药物的市场需求也逐年增多，这对生物反应器放大工艺要求也越来越高。细胞规模化放大工艺已从从简单的补料分批培养发展到灌流培养技术。