苏州阿尔法生物实验器材有限公司

13年专注生物实验室仪器设备&耗材综合供应

0512-6295610418934597460

实验室耗材 上千款产品 丰富齐全
  • 流式凋亡试剂盒
细胞凋亡检测试剂盒-Annexin V-Alexa Fluor 647/PI ​

细胞凋亡检测试剂盒原理: 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS) 从细胞膜内转移到细胞膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS 有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。因此,可以采用 Annexin V 与 PI 双染的方法,通过流式检测细胞早期凋亡。 

全国热线

0512-62956104

细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 647/PI)


   货号                 规格

 BDLS4002-20     20T

 BDLS4002-50      50T

 BDLS4002-100    100T 

检测方法:采用 Annexin V 与 PI 双染的方法

 储存条件:2-8℃避光保存(勿冰冻) 

    细胞凋亡检测试剂盒介绍:

      细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS) 从细胞膜内转移到细胞膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一种带负电荷的磷脂,正常 主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使 PS 暴露在细胞膜外。

   Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS 有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此,可以采用 Annexin V 与 PI 双染的方法,通过流式检测细胞早期凋亡。 

注意事项:

本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。此产品仅供研究,不用于临床

试剂盒组份 

1. 结合缓冲液 4× (Binding Buffer 4×) 体积:20 Tests: 4ml(4 倍浓缩液) 50 Tests: 10ml(4 倍浓缩液) 100 Tests: 20ml(4 倍浓缩液) 

稀释后溶液中各组分浓度:10mM Hepes/NaOH, pH 7.4, 140mM NaCl, 2.5mM CaCl2 2. 碘化丙锭溶液 (Propidium Iodide, PI) 

体积: 20 Tests: 0.2ml; 50 Tests: 0.5ml ;100 Tests: 1.0ml 

浓度: 20μg/ml 

3. 重组人 Annexin V/Alexa Fluor 647 , (rh Annexin V/Alexa Fluor 647 )

来 源:大肠杆菌(E.coli) 分 子 量:35.8 KDa 

样 品 量:

20 Tests: 0.1ml,可用于 20 次实验 

 50 Tests: 0.25ml,可用于 50 次实验

 100 Tests: 0.5ml,可用于 100 次实验 

保存方法:于 50mM Tris, 100mM NaCl, 1%BSA, 0.02%NaN3,pH7.4 溶液中保存 

纯 度:SDS-PAGE 及反相 HPLC 表明纯度大于 98% 

生物活性:Annexin V 可结合于磷酯酰丝氨酸并表现出抗磷酯酶活性 

实验操作步骤

 1. 细胞样品的准备:

 a)对于贴壁细胞:小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用不含 EDTA 的胰酶消化细胞, 至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的 贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。 

1000rpm 左右离心 5min,沉淀细胞。 对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离 心力。小心吸除上清,可以残留约 50µl 左右的培养液,以避免吸走细胞。

加入约 1ml 4℃预 冷的 PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。 

b)对于悬浮细胞:1000rpm 左右离心 5min,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞无法完全 离心至离心管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约 50µl 左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约 1ml 4℃ 预冷的 PBS,重悬细胞,再次离心 沉淀细胞,小心吸除上清。

 2. 用去离子水按 1:3 稀释结合缓冲液(4ml 4x 结合缓冲液+12ml 去离子水);

 3. 用 1x 结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为 1-5x106 /ml;

 4. 取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V/Alexa Fluor 647 和 10μl 20μg/ml 的碘化丙锭溶液;混匀后于室温避光孵育 5 分钟; 

5. 加入 10ul 20ug/ml 的碘化丙锭溶液(PI),并加 400μl PBS,立刻流式检测。 

实验设计:

 1)未转染细胞 空白管:阴性对照组细胞,不加 Annexin V/Alexa Fluor 647 ,碘化丙锭溶液(PI)。用于调节电压。 

检测管:处理的细胞,加 Annexin V/Alexa Fluor 647 ,碘化丙锭溶液(PI)。

用空白管和单阳 管调节好电压补偿后,获得所需要的流式数据。

 注:无需用单染管 Annexin V/Alexa Fluor 647 调补偿。 

2) 转染 GFP 细胞 未转染空白管:未转染细胞,不加 Annexin V/Alexa Fluor 647,碘化丙锭溶液(PI)。

用于调节 电压 转染 GFP 空白管:转染 GFP 对照组细胞,不加转染 Annexin V/Alexa Fluor 647,碘化丙锭 溶液(PI)。

用于调节补偿 检测管:处理的细胞,加 Annexin V/Alexa Fluor 647,碘化丙锭溶液(PI)。调节好电压补偿 后,获得所需要的流式数据。

 常见问题:

 1、 Annexin V/ PI 凋亡检测的试剂盒能否检测人以外其他动物的细胞凋亡情况?

 可以。因为 Annexin V 是与磷脂酰丝氨酸(PS)亲和,而 PS 在不同种属间没差异。在正常细胞中,PS 只 3 / 3 分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,PS 由脂膜内侧翻向外侧。

 2、 贴壁细胞做凋亡用胰酶消化下来对细胞膜损伤?

 低浓度胰酶消化,轻柔吹打贴壁细胞 2~3 次,离心机 4℃1000rpm 5min 离心,处理得当的话,胰酶造成 损伤可以控制在 5%以内,有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。

 3、 贴壁细胞可以先染 PI 然后再消化下来吗?

这样是否可以减小由于消化液造成的细胞 膜破损而染上的 PI 的误差? 

先加 PI 不仅染色是否每组都均匀充分很难判断,而且 PI 本身对细胞也是有毒性的,对实验结果影响会 比胰酶大,不建议这样做。

 4、 为什么只能用不含 EDTA 的胰酶消化贴壁细胞,用含 EDTA 的胰酶消化细胞对结果有 什么影响?

 因为 Annexin V 是 Ca 依赖的蛋白,所以不能加入 EDTA,防止 EDTA 螯合了 Ca 离子从而影响 Annexin V,进而影响结果。 

5、 有些厂家说明书 Annexin V 和 PI 一起加?为什么你们先加 Annexin V 后加 PI? 

用流式检测凋亡时,PI 受时间的影响很大,因标记了 PI 后会加大细胞毒性,随着时间延长会导致 PI 的 染色增加,特别是检测早期凋亡时,如果时间延长除了会导致在流式细胞仪上的细胞分群差距加大外,误 差会明显加大。一般 PI 加上后立刻上机,然后在一个小时内检测完成。两种方法都可以,但是按照我们 操作步骤造成的误差会更小。

 6、 你们哪种凋亡检测试剂盒能用于转染 GFP 细胞的凋亡检测?

 BDLS4004 Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit 凋亡检测试剂盒 BDLS4002 Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Kit

细胞凋亡检测效果


细胞凋亡检测试剂盒 凋亡检测试剂盒 实验参考图片 Jurkat 细胞用顺铂诱导凋亡后用 Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 双染流式分析图谱

尊敬的访客:

当您来到这个页面时,您已成为我们最尊贵的客户,苏州阿尔法生物实验器材有限公司真诚欢迎您的到来!

联系我们
免费服务电话:0512-62956104十三年专注于生物实验室仪器供应

热品推荐 / Hot product

楚怡 BioCore-SUB 一次性生物反应器动物细胞培养不锈钢罐

楚怡 BioCore-SUB 一次性生物反应器动物细胞培养不锈钢罐

BioCoreSUB一次性生物反应器控制器,适合从12.5L至2000L工作体积的不同公司的一次性生物反应器袋子,可用于快速工艺开发,并实现商业化生产的无缝放大。可以批次培养、补料培养和灌注培养。控制系统采用上海楚怡自主研发的BioCoresoftware系统,可实现灵活的配置需求,一次性反应袋适配于多个品牌确保用户供应链安全。
楚怡 BioCore QF Pro不锈钢微生物发酵系统

楚怡 BioCore QF Pro不锈钢微生物发酵系统

•模块化设计,节约空间•插针式补料口,使用方便•开放式设计,使用维修方便•多用户保护功能•可设定多级控制和查看权限
楚怡 BioCore QC pro 不锈钢篮式贴壁培养生物反应器

楚怡 BioCore QC pro 不锈钢篮式贴壁培养生物反应器

•传氧效果好,满足高密度细胞培养要求•双温度PID控制,控温稳定,精度高•操作安全、可靠,方便•开放式设计,使用、维修方便•伺服电机扭力大,工作稳定可靠
楚怡 BioCore QC台式细胞生物反应器玻璃

楚怡 BioCore QC台式细胞生物反应器玻璃

•PLC作为控制系统,可靠、稳定•溶氧控制精确•选用高品质部件,确保反应器质量•防腐蚀,易清洁•安装简单方便,插电和通气即可使用

阿尔法产品中心

全国服务热线

0512-62956104