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  • RNA去除
TIANSeq rRNA Depletion Kit -RNA去除试剂盒

 TIANSeq rRNA Depletion Kit -RNA去除试剂盒试剂盒对于完整和部分降解的总RNA(如FFPE RNA)均具有较好的rRNA去除效 果,所获得的去除了rRNA的RNA样本可用于mRNA和非编码RNA高通量测序,可提高测序结果中有效数据比例,纯化产物也可用于随机引物cDNA合成或其它下游应用。

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NR101

产品简介

 TIANSeq rRNA Depletion Kit (H/M/R) 采用特殊设计的DNA探针与核糖体RNA(rRNA)结合,利用Ribo RNase H降解DNA-rRNA杂交链中的rRNA,从而去除人、小鼠、大鼠 总RNA中的细胞质核糖体RNA(28S、18S、5.8S、5S)和线粒体内核糖体RNA(16S、 12S),保留信使RNA(mRNA)和其它非编码RNA。 

  该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA(如FFPE RNA)均具有较好的rRNA去除效 果,所获得的去除了rRNA的RNA样本可用于mRNA和非编码RNA高通量测序,可提高测序结果中有效数据比例,纯化产物也可用于随机引物cDNA合成或其它下游应用。

 产品特点


  •  样本广泛:适用于高质量(完整)及部分降解(如FFPE)样本中rRNA的去除。 
  • 高效去除:有效去除95~99.9%的人/小鼠/大鼠的rRNA。
  •  数据全面:保留了不完整mRNA和非编码RNA信息,使转录组数据更加全面。 
  • 快速评估:试剂盒中提供的引物可快速评估rRNA的去除效果。


 推荐使用的其他试剂 

1. 去除rRNA的RNA纯化:TIANSeq RNA Clean Beads (TIANGEN Cat#NG307)。 

2. PCR检测rRNA去除效率,FastKing RT Kit (With gDNase) (TIANGEN Cat#KR116), SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) (TIANGEN Cat#FP205) 。 

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

 1. 操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。

 2. 请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、离心管进行实验。

 3. 实验开始前,请清洁操作台,建议使用RNA酶及DNA酶清除试剂处理台面。

    确保没有 RNA酶和DNA酶的污染。

两步法4

4. 瞬时离心,将样品置于PCR仪中(启用热盖99~105℃均可),按以下程序操作,总共耗 时约20 min。

 注意:必须慢速降温(每秒降温0.1℃),使探针与rRNA充分结合。

两步法2

操作步骤二

四、RNA纯化 

推荐使用磁珠纯化产品TIANSeq RNA Clean Beads (TIANGEN Cat#NG307),也可使 用Agencourt RNAClean XP (Beckman Coulter)。 

1. 涡旋振荡混匀TIANSeq RNA Clean Beads,吸取110 μl (2.2倍体积) 至步骤三的50 μl RNA产物,用移液器吸吹混匀10次。 

2. 室温静置15 min,使RNA充分结合到磁珠上。

 3. 将样品置于磁力架上5 min,待溶液澄清后,用移液器小心移除上清。

 4. 保持样品始终处于磁力架上,加入200 μl新鲜配制的80%乙醇 (每次实验需要新鲜配 制,因为乙醇易从空气中吸收水分,浓度降低影响实验效果)漂洗磁珠 (不要吹散磁 珠) ,室温孵育30 sec,小心移除上清。

 5. 重复步骤4进行漂洗。

 6. 取出离心管短暂低速离心 (<2000 g, 10 sec) ,使液体收集至管底,将样品放回磁力架, 用移液器小心弃去所有液体。

 7. 保持样品始终处于磁力架上,开盖晾干磁珠3~5 min (不要过度干燥,否则可能降低 RNA回收率。洗脱应当在磁珠依然显深棕色且光亮,而且所有可见液体已完全挥发时进 行。若磁珠出现裂缝,则表示已过度干燥)。

 8. 将样品从磁力架上取出,加入6.5 μl RNase-Free ddH2O ,用移液器吹打10次混匀磁珠, 室温静置2 min。

 注意:上述洗脱体积适用于TIANSeq RNA文库构建试剂盒NR102或NR103,如搭配其他 RNA建库产品,请根据产品说明书选择合适的洗脱体积。

 9. 在磁力架上静置2 min,待溶液澄清后,不要触动磁珠,小心吸取5 μl上清 (可根据步骤8 选择的实际洗脱体积进行相应调整,尽量充分利用洗脱产物)至新的Nuclease-Free PCR 管。

 10. 洗脱样品可立即用于RNA测序文库构建或其他分析应用,也可在-20℃保存过夜或 在-80℃保存30天。

步骤五



步骤六


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