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Prepacked Desalting Column葡聚糖凝胶过滤层析​法蛋白纯化脱盐柱​
Prepacked Desalting Column葡聚糖凝胶过滤层析法蛋白纯化脱盐柱装有8.3 ml Smartdex G-25中。Smartdex G-25系列介质是以葡聚糖为基质的凝胶过滤层析介质,其工作原理主要是利用具有网状结构的葡聚糖凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。
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Prepacked Desalting Column葡聚糖凝胶过滤层析法蛋白纯化脱盐柱

Prepacked Desalting Column适用于分子量大于5000Da的蛋白或其他大分子样品的脱盐、缓冲液置换或小分子的去除。

Prepacked Desalting Column葡聚糖凝胶过滤层析法蛋白纯化 脱盐柱 装有8.3 ml Smartdex G-25中。Smartdex G-25系列介质是以葡聚糖为基质的凝胶过滤层析介质,其工作原理主要是利用具有网状结构的葡聚糖凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进 行分离。

表 1. Prepacked Desalting Column 产品性能

介质

Smartdex G-25

粒径

85-260 pm

柱体积

8.3 ml

最大上样量

2.5 ml

脱盐效率

>90%

排阻极限

Mr 5000

保存温度

2-8 °C


2. 使用说明

2.1缓冲液的准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 pm或0.45 pm滤膜过滤。 平衡液为蛋白脱盐后,用于保护蛋白的溶液,根据客户需求自行选择。

2.2样品准备

样品在上样前建议离心或用0.22 pm或0.45|jiti滤膜过滤,减少杂质,防止堵塞柱子。

2.3样品脱盐

脱盐流程

图1.使用Prepacked Desalting Column脱盐流程示意图

1) 脱盐柱准备

将Prepacked Desalting Column垂直置于重力柱支架上,或用铁架台固定,先后打开上盖、下盖,依靠重力流干保护液。

2) 平衡

加入4 ml平衡液(自主选择合适溶液)对预装介质进行平衡,重复5次,最终使用平衡液体积约3倍介质体积。

3) 上样

加入样品,样品上样体积范围1.0-2.5 ml,最大不超过2.5 ml,上样体积不足时用平衡液稀释样品至1.0 mlo

4) 洗脱

待样品进入填料后,继续加入平衡液进行洗脱,分管收集洗脱液,从加入样品开始,先收集前端2.0 ml,然后再按照固定体积(建议0.5-1 ml/管)收集样品,检测每管蛋白浓度和盐浓度,计算回收率和脱盐效率。平衡液至少添加至蛋白洗脱完全再停止。

5) 再平衡

加入4 ml平衡液对介质进行再平衡,重复至少5次,将残留的盐冲洗干净,方可进行下一次脱盐。同一个柱子不建议用于不同样品的脱盐。

3. 清洗及保存

如果柱子的流速或者脱盐效果变差,为除去残留的杂质,如变性蛋白或脂质等,有时需要对脱盐柱进行在位清洗。常用的清洗液为0.1-0.2 M NaOH或非离子型去垢剂。

1) 加入一倍的柱体积0.1-0.2 M NaOH,依靠重力清洗介质。

2) 加入足够量的去离子水,冲洗介质,直至pH值至中性。

3) 加入至少三倍柱体积20%乙醇溶液冲洗介质,然后盖好上盖和下塞,在介质上端保留至少1cm高的20%乙醇保护液,置于2-8°C保存。 注:不建议介质多次重复再生和使用。

4 .Prepacked Desalting Column葡聚糖凝胶过滤层析法蛋白纯化 脱盐柱 订购信息

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