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  • 琼脂糖凝胶填料
Smartaroe 琼脂糖凝胶过滤基质填料

Smartaroe是一种球形琼脂糖凝胶过滤基质,Smartaroe4B和Smartaroe6B的琼脂糖含量分别为4%和6%oSmartaroeCL凝胶是Smartaroe4B和Smartaroe6B的衍生物,化学和物理性能更优异,流速更快。

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Smartarose是一种球形琼脂糖凝胶过滤基质,Smartarose 4B和Smartarose 6B的琼脂糖含量分别为4%和6%o Smartarose CL凝胶是 Smartarose 4B和Smartarose 6B的衍生物,化学和物理性能更优异,流速更快。Smartarose CL凝胶耐有机溶剂,因此适合在有机溶剂 中分离物质。Smartarose和Smartarose CL分离范围较广,适合对分子量不同的样品进行表征或分离。


琼脂糖凝胶填料性能

项目

性能

Smartarose 琼脂糖 最佳分离范围 粒径 推荐线性流速* (cm/h) pH稳定性**

4B 6B CL-4B CL-6B

4% 6% 4% 6%

70x103-20x106 1Qx103 -4x106 70x103-20x106 10x10 3-4x106

45-165 pm

11 cm/h 14 cm/h 26 cm/h 30 cm/h

4-9 4-9 3-13 3-13

耐受凝胶层析常用溶液,如8 M尿素、6 M 盐酸

试剂耐受

耐受凝胶层析常用溶液,如8 M尿素、6M盐酸 Mo也耐受乙醇、DMFTHE 丙酮、DMS 弧。 氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、卩比卩定、磷酸三乙

酯和乙月青等有机溶剂。

物理性能 灭菌

pH或离子强度变化引起的体积变化可以忽略不计

化学方法 水蒸气高压灭菌,120°C, 20 min

   pH范围是我们根据实验和经验估算的。请注意:pH长期稳定性是指凝胶在长时间内其层析性能不会改变的pH范围。pH短期稳定性是指凝胶再生和清洗时稳定的pH范围。

装柱说明:

介质保存于20%乙醇。装柱前建议将20%乙醇抽滤去除,置换成去离子水。

将75%介质和25%去离子水混句,真空负压脱气。不要使用粘性试剂装柱。装柱完成后,可以用粘性缓冲液低流速平衡层析柱。

2.2介质装填

装柱方法有两步,第二步应在恒压下进行,柱压见表2。凝胶层析的分辨率随柱床高度的增加而增加。因此,柱床高度最好在60 cm以上。

表2.推荐装柱流速和压力

介质

步骤1

流速(cm/h)

步骤2

压力(MPa.bar.Psi)

Smartarose 4B

15

0.018,0.18,2.6

Smartarose 6B

30

0.025,0.25,3.6

Smartarose CL-4B

30

0.025,0.25,3.6

Smartarose CL-6B

30

0.045,0.45,6.4

层析柱的装填(使用储液器装填)

装柱前根据层析柱直径计算柱子底面积,根据所需装柱高度计算所需介质体积,公式如下: V = 1.157ir2h

 

V:所需介质体积ml

1.15:压缩系数(不同介质压缩系数不同)

r:柱管半径cm

h:装填高度cm

1) 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2 cm的去离子水。

2) 将填料悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

3) 如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。

4) 打开层析柱底部出口,开启泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液 压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用你所使用泵的最大流速,这样也可以得到 一个很好的装填效果。(注意:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%)当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上2 倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。

5) 关闭泵,关闭层析柱出口。

6) 如果使用储液器,去除储液器,将分配器置于层析柱中。

7) 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。

8) 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。

2.3柱效测试

为了检验层析柱的质量,应进行柱效测试,以确定理论塔板数和峰不对称系数。

洗脱液:去离子水

样品:2% (v/v)丙酮水溶液或者1 M NaCI溶液

如图1所示计算理论塔板数,用如下公式:N/m = 5.54 (VrM)2 x 1000/L

计算峰不对称系数(AS)公式如下:AS = b/a (如图1所示)

 琼脂糖凝胶

 

3 .纯化流程

3.1缓冲液的准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 pm或0.45 pm滤膜过滤。

平衡液为蛋白纯化后,用于保护蛋白的溶液,根据客户需求自行选择。

3.2样品准备

样品在上样前建议离心或用0.22 pm或0.45|jm滤膜过滤,减少杂质,防止堵塞柱子。

3.3样品纯化

1) 平衡

上样之前,用平衡液至少平衡两个柱体积,或直到基线稳定。含去垢剂的溶液可能需要平衡更长时间。

2) 上样

推荐上样体积为柱体积的2-5%o可以通过上样管或样品环来上样。纯化流速最高不能超过装柱流速的70%0

3) 再生

再生通常用水冲洗2倍柱体积,然后用缓冲液冲洗2-3倍柱体积,如果不立刻使用,则用20%乙醇平衡后,4-30°C保存。对不同的样品, 建议大约5次循环后,采用完整的在位清洗(CIP)o

4.清洗及保存

4.1 CIP (Cleaning In Place)清洗

CIP是去除以前生产过程中产生的结合过紧密、沉淀或变性的物质。在某些情况下,介质再生后,月謳或变性蛋白跡物质仍可育诫留茁扫=o 需要制鵰料中已知污染I刎楼来设H特定的CIP程序。

当出现下列情况,需要对介质进行在位清洗:

•柱压增高;

•填料颜色变化明显;

•分辨率降低;

•上接头与凝胶表面之间出现空隙;

•如果反压增高,在介质清洗前检查阀门、管线等中止情况。

1) 去除非特异性结合蛋白和脂蛋白

用0.5 M NaOH清洗一个柱体积,去离子水或缓冲液平衡至中性,流速40 cm/ho

2) 去除一些沉淀或变性物质,建议使用下面的方法

用4倍柱体积的1.0-2.0 M NaOH溶液,流速40 cm/h对介质进行清洗,然后立即用2-3倍柱体积的水清洗。

3) 去除一些强结合的疏水蛋白

用4-10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗(使用有机溶剂要梯度清洗,避免起泡)或者用含去垢剂的酸或中性溶液。比如,用1 M 醋酸溶液含0.5%非离子型去垢剂,清洗流速40 cm/h。随后用70%乙醇冲洗5个柱体积洗去残留去垢剂。

4.2保存

CIP之后的介质如果不使用可以用20%乙醇,4 -30°C保存。

5 .订购信息及相关产品

产品名称

货号

规格

 

SEC0060

25 ml

 

SEC0061

100 ml

Smartarose 4B

SEC0062

500 ml

 

SEC0063

1 L

 

SEC0064

10 L

 

SEC0070

25 ml

 

SEC0071

100 ml

Smartarose 6B

SEC0072

500 ml

 

SEC0073

1 L

 

SEC0074

10L

 

SEC0080

25 ml

 

SEC0081

100 ml

Smartarose CL-4B

SEC0082

500 ml

 

SEC0083

1 L

 

SEC0084

10L

 

SEC0090

25 ml

 

SEC0091

100 ml

Smartarose CL-6B

SEC0092

500 ml

 

SEC0093

1 L

 

SEC0094

10 L


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