细胞培养是指使真核或原核细胞在生理条件下生长的实验室方法。它的起源可以追溯到 20 世纪初，当时它被引入研究组织生长和成熟、病毒生物学和疫苗开发、基因在疾病和健康中的作用，以及使用大规模杂交细胞系生产生物制药。建立细胞培养实验室应具备的条件有哪些？

细胞培养实验室

细胞培养实验室安全

   细胞培养过程中需要管理与培养细胞携带的感染因子（例如 HBV 或 HIV）相关的潜在危害，还需要控制可能具有毒性、腐蚀性或致突变性的试剂。这些潜在危害进入人体后（例如，通过皮肤和粘膜与固体、液体或气溶胶接触）会危及实验室工作人员的健康，并在处理不当时威胁环境。

实验室安全

细胞实验室安全主要包括：

● 每个实验室工作人员都应对自己的健康和安全以及可能受到细胞培养实验室工作影响的其他人的健康和安全负责。

● 进入细胞培养实验室时必须穿戴个人防护设备，离开或污染任何个人防护设备时必须脱掉。在处理危险剂时，必须立即取下可能受污染的手套并将其丢弃在生物危害废物中。洗手。

●不建议穿着露趾鞋、短裤和裙子暴露皮肤。

●细胞培养实验室内不允许食用食物、饮料、储存杂货、吸烟、使用化妆品或处理隐形眼镜。

●在细胞培养实验室工作时不应使用手机。

●开始工作前应脱掉宽松的衣服（例如围巾、悬垂的项链），并将头发系在脑后。

●细胞培养实验室必须保持整洁并定期用消毒剂清洁（例如培养箱、层流罩和工作台面）。

●所有与潜在传染性或危险物质接触的实验室工具在使用前后都必须进行净化处理。具有潜在感染性和危险性的材料必须通过他们推荐的路线进行净化和处置。

●尖锐物品（例如移液器吸头）必须立即通过指定的尖锐物品箱进行处理。

●离开细胞培养实验室前应洗手。

●在接触或溢出传染性或危险物质时，应通知实验室的安全官员，以就适当的遏制和净化策略提出建议。

细胞系的安全处理

  危险病原体咨询委员会 (ACDP) 是由健康与安全执行官 (HSE) 管理的国家机构。它就接触病原体对工人和其他人造成的危害和风险提出建议，并发布了这些建议。由于某些细胞类型具有致病性或携带致病因子，因此确定细胞系的危险系数并实施适当的安全措施非常重要。细胞系的安全处理主要包括书面风险评估和实验室设施审查。

   分类为危险组 1 的微生物（例如，大肠杆菌K-12）或 2（例如，金黄色葡萄球菌）代表对实验室工作人员和社区的低度或中度健康风险，并且依赖于有效的预防或治疗方案。使用危险组 3 的生物制剂进行细胞培养（例如，严重急性呼吸系统综合症相关冠状病毒（SARS-CoV））和 4（例如，埃博拉病毒）涉及具有高健康风险的生物制剂，并且在感染后可能缺乏治疗选择。

因此，实验室空间需要提供与培养细胞类型的危险组相对应的防护等级。 

细胞培养实验室的安全要求

   为了确保使用细胞系和生物危害剂的安全工作环境，必须在细胞培养实验室中佩戴个人防护设备 (PPE)。实验室工作服、手套和护目镜在实验室工作人员和潜在危险源之间形成一道屏障。此外，生物安全柜依靠 HEPA 过滤空气的稳定、单向流动，创造一个封闭、通风的工作空间。这较大程度地减少了研究人员和环境对与培养细胞相关的有害物质的暴露，同时保护细胞培养物免受污染。在细胞培养实验室处理细胞培养基和进行实验时，还建议查看与实验室试剂相关的材料安全数据表 (MSDS)。

细胞培养方法

尽管在不同的细胞培养实验室中采用了各种技术和检测方法，但细胞培养工作的共同主题是无菌——创造一个没有不需要的病原微生物（包括细菌、病毒、真菌和寄生虫）的微环境。由于无菌是成功的细胞培养工作的重要组成部分，因此需要建立单独的细胞房或指定区域，不得用于其他目的。

细胞房常用的实验室设备如下：

生物安全柜：创造无菌工作台面；II类和III类推荐

CO 2培养箱：为细胞生长提供生理环境

倒置光学显微镜：评估细胞形态和计数细胞

冰箱、冰柜（-20°C、-80°C）：储存细胞、细胞材料和培养成分

离心机：细胞分离、浓缩细胞

酸度计：确定培养基成分的正确 pH 值

移液器和移液吸头：分装不同体积的细胞，分装试剂

细胞培养基和辅助成分：培养细胞（养分来源）

细胞计数仪：对细胞进行计数，确定生长动力学并准备合适的接种密度

高压灭菌器：对与细胞接触的移液器和其他设备进行消毒

真空泵：吸出细胞培养基

水浴锅（可调温）：预热细胞培养基，解冻细胞

细胞培养皿、细胞培养瓶：以不同形式培养细胞（例如，烧瓶、培养皿、96 孔板）

三角摇瓶、生物反应器：适用于大规模细胞培养

废物容器（生物危害）：垃圾分类处理

其他设备：包括 流式细胞仪、细胞分选仪、活细胞成像分析仪等。#细胞培养瓶#

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