细胞外囊泡 (EV) 是参与细胞间通讯的膜封闭囊泡。由于递送的 EV 货物分子（包括 mRNA 和microRNA）会影响靶细胞基因表达、功能和表型，因此 EV 作为不同疾病的使用剂具有广阔的前景。据报道，间充质基质细胞(MSC) 分泌的 EV 对肾脏、心血管和神经系统疾病均一影响作用。例如细胞移植、基于 EV 的疗法被认为更易于制造、储存和运输。

   评估 EV 使用效果的研究提供了可喜的结果，但从细胞培养基中分离 EV 仍然具有挑战性。越来越多的数据表明，通常用作细胞培养基补充剂的胎牛血清(FBS) 中包含的囊泡会污染细胞分泌囊泡的纯化过程。从培养基中省略 FBS 是克服此问题的一种选择，但无血清培养条件会影响 EV 的数量和蛋白质组成，例如神经母细胞瘤衍生的 EV。

以前的实验中科学家已经从啮齿动物原代皮层培养神经元中分离出了 EV 。

  神经元 EV 在中枢神经系统的细胞间通讯中具有重要功能。神经元分泌的 EV 被其他神经元和星形胶质细胞吸收，并改变受体细胞的功能。EV 已从人类诱导多能干细胞(hiPSC) 衍生的神经元培养物中分离出来。这些研究主要侧重于研究 EV、它们的RNA或它们的蛋白质货物的疾病特异性，很少研究神经元培养条件的差异。此外，一些研究使用了超速离心或基于沉淀的 EV 分离方法，导致纯化效果也不佳。近期的一项研究表明，在超速离心纯化中添加 SEC 步骤可提高 MSC 衍生 EV 的使用效果，突出了 EV 纯化效率的重要性。

   该项实验研究中，科学家们使用 UF-SEC 从 MSC 的细胞培养基中分离 EV。他们使用商业外泌体耗尽的 FBS (Exo-FBS) 并在非条件培养基中与条件培养基同时进行 EV 分离和分析。 接下来，探讨了 hiPSC 神经元的不同细胞培养条件，以评估它们对 EV 分泌的影响。并使用纳米粒子跟踪分析 (NTA) 和盲透射电子显微镜分析 (TEM)评估了分泌的 EV 数。

   在本项实验研究中，科学家们使用了一种名为UF-SEC的方法来纯化来源于MSC的EV。这种方法可以从培养基中分离出相对高纯度的EV，且产量较高。

   接下来，研究人员探讨了hiPSC神经元在不同细胞培养条件下分泌的EV数量和特征。他们发现，在不同的培养条件下，神经元分泌的EV数量存在较大差异，并且这些EV所携带的RNA和蛋白质也存在不同程度的变化。

   使用无血清培养基（NS）的神经元分泌的EV数量为(2.19 ± 0.38) × 10^8 /mL，而使用有血清培养基（CS）的神经元分泌的EV数量为(4.1 ± 0.52) × 10^8 /mL。

   在神经元成熟不同阶段时，分泌的EV数量也存在显著差异。在EE期（early excitatory），分泌的EV数量为(3.48 ± 0.85) × 10^8 /mL，而在LE期（late excitatory），分泌的EV数量为(1.88 ± 0.25) × 10^8 /mL。

  刺激hiPSC神经元（KCl处理）会导致其分泌更多的EV。在添加25 mM KCl的情况下，分泌的EV数量为(7.44 ± 1.15) × 10^8 /mL，而在未添加KCl的情况下，分泌的EV数量为(3.85 ± 0.37) × 10^8 /mL。

   此外，研究人员还发现，从不同培养条件下分泌的EV中所携带的RNA和蛋白质也存在不同程度的变化。例如，在CS培养基中分泌的EV中，与代谢有关的蛋白质数量更多，而在NS培养基中分泌的EV中，则检测到更多的神经元活动相关的蛋白质。 同时，随着越来越多的研究也揭示了不同细胞培养条件对EV数量和特征的影响。总之，EV作为一种新型治疗剂具有广阔的应用前景，并且在未来的研究中，我们需要进一步深入探究其分泌机制和生物学特性。

  使用去除外泌体的培养基，可以避免外源性的EVs污染，提高所分离出的EVs的纯度和有效性。这对于MSC研究和应用都具有重要意义。因此，越来越多的研究者选择使用去除外泌体的培养基来培养MSC和生产EVs。除了提高EVs的纯度和有效性以外，去除外泌体的培养基还可以减少对细胞的刺激和损伤，从而提高MSC的存活率和增殖能力。此外，去除外泌体还可以改善细胞培养过程中的稳定性和可重复性，从而使得MSC的研究更加精确和可靠。

   为满足科研和临床的需要，苏州阿尔法生物提供了间充质干细胞去外泌体培养基，用于MSC的体外培养和EVs的生产。这种培养基使用商业外泌体耗尽的FBS(Exo-FBS)作为血清替代品，有效去除培养基中的外泌体，并提高MSC的存活率和增殖能力，同时保证了EVs的纯度和有效性。更多细胞培养基相关内容进入苏州阿尔法生物实验器材有限公司官网或 0512-62956104/18934597460进行咨询。

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