我们之前分享了影响贴壁细胞培养的5个关键因素。不少实验人员反馈，在解决了贴壁问题后，又遇到了新的困扰：同样的培养条件，细胞却越来越难养；生长速度越来越慢，培养周期越来越长；转染效率下降，实验结果波动越来越大；明明没有污染，细胞状态却一天不如一天。

   很多人会把原因归结于培养基、血清或培养箱，但实际上，还有一个容易被忽略的重要因素——传代次数（Passage Number，P数） 。

今天，我们就来聊聊：为什么细胞会“越养越难养”？

01 什么是传代次数？

细胞在培养过程中，当生长至一定融合度后，需要重新分散并接种到新的培养器皿中继续培养，这一过程称为传代（Passage）。

每完成一次传代，细胞的P数（Passage Number）就增加1。

例如：

原代培养后的第一次传代：P1

第二次传代：P2

第十次传代：P10

P数不仅是细胞培养过程中的记录指标，更是评估细胞状态和实验可靠性的重要参考。

需要注意的是：P数越高，并不意味着细胞一定不能用，但长期连续传代会增加细胞发生变化的风险。

02 为什么传代次数会影响细胞状态？

细胞并不是可以无限保持相同状态。

随着连续传代，细胞可能逐渐发生遗传和生物学特性的改变，即使培养条件没有变化，实验表现也可能出现差异。

常见表现包括：

① 增殖速度下降

细胞达到相同融合度所需时间越来越长，培养周期延长。

② 贴壁能力减弱

贴壁细胞可能出现贴壁慢、铺展不均、漂浮细胞增多等现象。

③ 细胞形态改变

细胞体积增大、形态不规则、空泡增多，甚至不同细胞之间大小差异明显。

④ 实验结果波动

长期高代次细胞可能出现：转染效率下降；药物敏感性改变；基因或蛋白表达发生变化；实验重复性降低。

因此，即使细胞还能继续生长，也不一定适合作为实验材料。

03 如何科学管理传代次数？

合理的细胞管理，是保证实验稳定性的关键。

✅ 建立低代次细胞库

收到新的细胞后，建议尽早冻存一批状态良好的低代次细胞，建立基础细胞库。这样，当连续培养时间过长或细胞状态下降时，可以及时恢复到低代次细胞，减少长期培养带来的影响。

✅ 规范记录P数

建议建立完整的细胞培养记录，包括：Passage Number（P数）、传代日期、冻存日期、复苏日期、培养条件、细胞状态。完整的记录不仅方便实验追溯，也有助于发现细胞状态变化的规律。

✅ 同一实验尽量使用相近代次细胞

对于需要重复验证的实验，应尽量使用相近P数的细胞。避免因为细胞代次差异，而影响实验数据的可比性和重复性。

✅ 定期评估细胞状态

不要仅凭细胞是否还在生长来判断是否继续使用。应综合观察：增殖速度、细胞形态、贴壁情况、实验表现。一旦发现明显异常，应及时启用低代次冻存细胞，而不是继续无限传代。

04 耐思在实验中的产品支持

围绕细胞培养的常见应用场景，耐思提供多种稳定、可控的一次性耗材解决方案：

 

细胞培养瓶 / 培养板

高透明度，便于观察细胞形态与贴壁状态

稳定的表面性能，支持贴壁细胞培养需求

针对贴壁细胞培养需求，耐思细胞培养类耗材提供TC处理与未TC处理两种规格，可根据具体实验场景灵活选购。TC（Tissue Culture）表面处理通过对高品质聚苯乙烯（PS）基材表面进行受控改性，从而增强细胞附着能力，促进贴壁细胞快速铺展与稳定生长。

 

离心管 / 冻存管

良好密封性，降低细胞转移与储存过程中的风险

适用于细胞收集、冻存及复苏等基础操作

 

血清移液管 / 吸头

内壁光滑，液体残留少

超强疏水性、超低吸附性

帮助降低人为操作带来的不确定因素

 

 

耐思细胞培养类耗材均保证：

无菌

无热源/内毒素

无细胞毒性

无DNA、无DNase/RNase

---

— 耐思（NEST）—

为细胞培养实验提供稳定可控的实验室耗材解决方案