苏州阿尔法生物实验器材有限公司

17年专注生物实验室仪器设备&耗材综合供应

0512-6295610418934597460

阿尔法构建全服务链体系 尊享高于原厂服务的价值
未经纯化的 PCR 产物直接酶切体系怎么设定?详细方法与注意事项
作者: 编辑: 来源: 发布日期: 2025.07.11
信息摘要:
    在分子生物学实验中,PCR 产物的酶切是常见操作。有时为节省时间和步骤,研究者会选择未经纯化的 PCR 产物直接进行酶切。那么,未经…

    在分子生物学实验中,PCR 产物的酶切是常见操作。有时为节省时间和步骤,研究者会选择未经纯化的 PCR 产物直接进行酶切。那么,未经纯化的 PCR 产物直接酶切该怎么设体系呢?本文将为你详细介绍相关内容。

尖分子

未经纯化的 PCR 产物直接酶切的可行性

  未经纯化的 PCR 产物中可能含有多种成分,如残留的引物、dNTPs、Taq DNA 聚合酶、Mg²⁺等,这些成分可能会对酶切反应产生一定影响,但在很多情况下,通过合理设定酶切体系,未经纯化的 PCR 产物直接酶切是可行的。
未经纯化的 PCR 产物直接酶切体系设定的影响因素

未经纯化的 PCR 产物直接酶切,其体系设定受多种因素影响。残留的引物会与限制性内切酶竞争结合位点,影响酶切效率;过量的 dNTPs 可能干扰酶的活性;Mg²⁺浓度过高也会对酶切反应产生抑制作用。因此,在设定体系时需充分考虑这些因素。

限制性内切酶

未经纯化的 PCR 产物直接酶切体系的设定方法
  1. 模板用量:通常情况下,未经纯化的 PCR 产物加入量不宜过多,一般控制在反应体系总体积的 10%-20% 左右。具体用量可根据 PCR 产物的浓度进行调整,浓度较高时可适当减少用量,避免过多杂质影响酶切。

  2. 酶的选择与用量:选择对 PCR 产物中残留杂质耐受性较强的限制性内切酶,如雷霆系列限制性内切酶。酶的用量可适当增加,一般为常规酶切用量的 1.5-2 倍,以抵消可能存在的抑制作用,提高酶切效率。

  3. 缓冲液:使用酶对应的最佳缓冲液,且缓冲液的量要充足,以保证反应体系的离子环境适宜。对于未经纯化的 PCR 产物,可适当提高缓冲液中 Mg²⁺的浓度(在酶的耐受范围内),有助于增强酶的活性。

  4. 反应体积:反应总体积一般建议在 20-50μL。适当扩大反应体积,可降低 PCR 产物中杂质的浓度,减少其对酶切反应的抑制。
  5. 反应时间:可适当延长酶切反应时间,通常为 30-60 分钟,以确保酶切充分。但需注意避免过长时间孵育导致酶的星活性出现。

  6. 分子互作仪-抗体鉴定

未经纯化的 PCR 产物直接酶切的注意事项
  1.   若 PCR 产物中含有较多的引物二聚体,可能会影响酶切效果,建议在酶切前通过琼脂糖凝胶电泳初步观察 PCR 产物的质量。
  1. 不同的 PCR 产物中杂质的种类和含量可能不同,因此在设定酶切体系时,可先进行小体积的预实验,根据结果调整体系参数。
  1. 酶切反应完成后,建议通过琼脂糖凝胶电泳检测酶切效果,若酶切不完全,可分析原因并重新优化体系。

总之,未经纯化的 PCR 产物直接酶切是可以实现的,关键在于合理设定酶切体系并注意相关事项,以提高酶切的效率和准确性。



苏州阿尔法生物实验器材有限公司成立于2008年,位于苏州园区生物纳米园(Biobay)A5幢301室。公司管理团队专注于科学仪器行业十四年,拥有专业的技术团队与完善的售后服务体系,目前已为300余家实验室提供优质产品和服务,涵盖各大高校、检测中心、科研机构、制药企业等13个群体。提供的实验室仪器主要包括振荡培养箱,恒温恒湿培养箱、二氧化碳培养箱、生化培养箱、霉菌培养箱、PCR仪,瑞宁移液器,生物反应器,发酵罐,超低温冰箱,液氮罐,高压灭菌器,超纯水机,天平,离心机,离心浓缩仪、研磨机、葡萄糖乳酸分析仪等。厂商企业授权包括知楚仪器、朗基、中科美菱,梅特勒,乐枫,搏旅、NEST、天根、奥盛在内的80个余厂家。

四张拼图

阿尔法推荐资讯

快速内切酶

限制性内切酶命名规则是什么?HindⅢ、EcoRI 等酶名的构成逻辑

在分子生物学的实验室里,有一种能精准切割DNA的"基因手术刀",叫限制性内切酶。但HindⅢ、EcoRI这些复杂名字总让人摸不着头脑,它们的命名其实藏着一套科学又有趣的规则,今天咱们就来拆解这些"分子剪刀"的身份密码。
2025-06-24
Q2000B

qPCR 常见问题及解决方法

qPCR(实时荧光定量PCR)技术以其高灵敏度、高特异性和快速性等优点,被广泛应用于基因表达分析、病原体检测等领域。
2024-09-26
苏州阿尔法生物

抗体生产中常用的实验室仪器实验试剂实验耗材一览表

抗体研发生产是一个复杂的过程,涉及多种实验室仪器、试剂和耗材。以下是抗体研发生产中常用的实验室仪器、试剂和耗材的一览表:实验室仪器:1.电子天平-用于精确称量试剂和样品。2.磁力搅拌器-用于搅拌溶液,加速反应。3.离心机-用于分离混合物中的不同成分。4.PCR仪-聚合酶链反应仪器,用于扩增DNA片段。5.凝胶成像......
2024-07-10

咨询热线

0512-62956104