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taq DNA 聚合酶和限制性内切酶哪种在分子生物学实验中用量较大?
作者: 编辑: 来源: 发布日期: 2025.04.23
信息摘要:
在分子生物学实验中用量较大的几种酶类主要有以下几种:1.TaqDNA聚合酶应用:PCR扩增(核心技术之一)特点:耐高温(95℃不变性),无需…

在分子生物学实验中用量较大的几种酶类主要有以下几种:

1. Taq DNA 聚合酶

应用:PCR 扩增(核心技术之一)

特点:耐高温(95℃不变性),无需每次循环后重新添加,广泛用于基因克隆、测序、突变检测等。

用量:几乎每个实验室日常 PCR 实验均需使用,单次反应仅需微量(0.1-1 μL),但因高通量需求,整体消耗大。

限制性内切酶

2. 反转录酶(如 M-MLV 反转录酶、AMV 反转录酶)

应用:RNA→cDNA 反转录(RT-PCR、qPCR、cDNA 文库构建)

特点:将 RNA 逆转录为 DNA,是 RNA 分析的关键步骤。

常用型号:M-MLV(耐低温,适合 RNA 二级结构多的样本)、AMV(耐高温,适合复杂模板)。

用量:随 RNA 相关研究(如基因表达分析)的普及而高频使用。

HaeIII内切酶

3. T4 DNA 连接酶

应用:DNA 片段连接(克隆、载体构建、PCR 产物拼接)

特点:需 ATP 辅助,可连接黏性末端和平末端,是分子克隆的核心工具。

用量:每次载体构建或 DNA 重组实验均需使用,虽单次用量少(1-5 μL),但使用场景广。

 限制性内切酶(如 EcoRI、HindIII、BamHI)

应用:DNA 特异性切割(酶切鉴定、载体线性化、基因克隆)

特点:识别特定序列并切割 DNA,常用 “工具酶” 如 EcoRI(识别 GAATTC)、HindIII(AAGCTT)等。

用量:单个酶单次用量少(0.5-2 μL),但因种类多、实验频率高,整体消耗量大。

5. DNA 聚合酶 IKlenow 片段)

应用:DNA 末端补平、探针标记、cDNA 第二链合成

特点:去除 5’→3’外切酶活性的 DNA 聚合酶 I 大片段,保留聚合酶活性和 3’→5’校对功能。

用量:在 DNA 修复、测序前处理等场景中高频使用。

6. 高保真 DNA 聚合酶(如 Pfu Q5 聚合酶)

应用:高准确性 PCR(克隆、定点突变、长片段扩增)

特点:含 3’→5’校对活性,错误率低于 Taq 酶,虽成本较高,但在精准克隆中必需。

用量:随基因工程和定向进化研究的需求增长而增加。

限制性内切酶 AscI

用量排序参考:

  • Taq DNA 聚合酶(基础 PCR,普适性最强)
  • 反转录酶(RNA→cDNA,分子表达分析核心)
  • T4 DNA 连接酶(克隆必需)
  • 限制性内切酶(常用型号如 EcoRI)(酶切基础操作)
  • 高保真 DNA 聚合酶(精准扩增需求增长)

     这些酶覆盖了分子生物学中的核心的技术 —— 扩增、反转录、连接、切割,是实验室日常消耗的 “主力”。如需一站式采购上述酶类及配套试剂,可联系苏州阿尔法生物其代理的 NEB、愚公生物,Thermo Fisher 等品牌提供全系列分子酶产品,同时二代 M-MLV 逆转录酶和LightNing 快速内切酶已通过 ISO 13485 认证,支持科研与工业级应用。

苏州阿尔法生物
官网: www.bioalpha2008.com
地址:中国江苏苏州工业园区星湖街 218 号生物纳米园 A5 楼 301 室

 



苏州阿尔法生物实验器材有限公司成立于2008年,位于苏州园区生物纳米园(Biobay)A5幢301室。公司管理团队专注于科学仪器行业十四年,拥有专业的技术团队与完善的售后服务体系,目前已为300余家实验室提供优质产品和服务,涵盖各大高校、检测中心、科研机构、制药企业等13个群体。提供的实验室仪器主要包括振荡培养箱,恒温恒湿培养箱、二氧化碳培养箱、生化培养箱、霉菌培养箱、PCR仪,瑞宁移液器,生物反应器,发酵罐,超低温冰箱,液氮罐,高压灭菌器,超纯水机,天平,离心机,离心浓缩仪、研磨机、葡萄糖乳酸分析仪等。厂商企业授权包括知楚仪器、朗基、中科美菱,梅特勒,乐枫,搏旅、NEST、天根、奥盛在内的80个余厂家。

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