MDCK细胞属于动物细胞一般采用Cytodex 作为微载体Cytodex 主要有两个系列 即：Cytodex 和 Cytopore ，其中 Cytodex 1适合大多数的贴壁细胞。

采用Cytodex 微载体的优势主要有以下几点：

1. Cytodex 微载体的表面比较适宜细胞的粘附和延展。

2. 优化后的大小和密度对于细胞悬浮较为有利，适宜细胞的生长和高产。

3. 这类细胞的细胞基质具有一定的生物惰性，可以减少搅拌培养过程中的剪切力损害。

4. Cytodex 微载体具有较好的可放大性。试验证明，良好的培养环境下采用搏旅悬浮细胞培养生物反应器可达 15,000 L产量规模，而采用贴壁细胞微载体培养生物反应器可达 6,000 L 左右的规模。

MDCK细胞的生物反应器微载体培养方法主要有以下几个步骤：

一、微载体的前处理：

用pH为7.4的PBS缓冲液将Cytodex系列微载体浸泡3~24H;反复清洗后用高压进行灭菌，冷却。并用含牛血清的培养基清洗后并加入同体积的培养基备用。2）

二、MDCK种子细胞的解冻复苏：

取出冻存中MDCK细胞，置于37℃-39℃的恒温水浴振荡器中进行解冻复苏，再植入细胞培养瓶中进行细胞培养。

三、细胞的转瓶扩培

当细胞培养瓶中的细胞生长到90%密度时用细胞消化液处理细胞，并接入摇瓶进行分瓶培养，当细胞生长到同样密度时，用培养基稀释接入生物反应器进行扩培。

四、生物反应器微载体培养：

MDCK细胞接种可以依照 比例为2-25g微载体/L（培养基）、5-50个细胞/载体的比例接入生物反应器中进行扩大培养。具体详尽参数可以根据相关的《胞培养操作说明》进行设定调整。

五、病毒的感染接种：

当生物反应器内培养的MDCK细胞90%在微载体表面形成致密层后，应当停止搅拌，当微载体沉淀于生物反应器的地步是，更新培养基，按照TPCK胰酶1-20μg/ml、病毒感染复数0.01-1接种病毒培养2h后，补充培养基与原来的量相一致；

六、病毒收获

当病毒接种10H后，需要每小时取样观察细胞的病变效应及CPE值，当CPE值大达80%以上时，即可进行病毒收获、分析测定等操作环节，结合分析结果与相关《检验规程》执行下一步操作。

【MDCK细胞生产疫苗流程】

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