实验材料：

基础培养基（液体或干粉）                PET/PETG方形试剂瓶[NEST]

血清（常规为FBS/NBS）                   补充剂

移液枪                                              电动移液枪

15mL、50mL无菌离心管[NEST]        灭菌超纯水                     

盒装无菌吸头[NEST]                          血清移液管[NEST]

超净工作台                                        双抗（青链霉素混合液）

杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]       针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]    

实验准备：

血清准备：

配置培养基前一天，将所需血清从-20℃冰库取出，放置入2-8℃冰箱缓慢解冻储存，使用前37℃水浴加热。

培养基准备：

液体基础培养基使用前37℃水浴加热。

实验流程：

基础培养基配置（干粉）：

根据配置体积，选择合适的灭菌后容器，在容器中倒入约90%体积的超纯水，将培养基干粉全部倒入该容器中，用少量超纯水将袋内残留粉末洗出。

搅拌30min使所有成分完全溶解，待溶液澄清后，根据说明书加入适当量的碳酸氢钠（分析纯），继续搅拌5-10min至溶解，随后超纯水定容并调节PH值。(过滤会使培养基PH值稍微偏高，所以用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调整PH值至7.20-7.30）

使用0.22μm杯式滤器[NEST]或0.22μm针式滤器[NEST]过滤除菌，并按照日常使用规格分装入PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中，2-8℃条件下避光保存备用。【菌检合格后方可使用】

培养基配置：

若含有补充剂，用1000μL无菌吸头[NEST]取出适量预热完成的基础培养基，注入补充剂西林瓶中，将其充分溶解，再将含有补充剂的培养基转移入基础培养基中。

接着按照血清使用比例，用血清移液管[NEST]吸取适量预热完成的血清，注入基础培养基中，盖上瓶盖充分混匀。

双抗加入：

除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不添加任何抗生素。若为防止细菌、真菌污染，或怀疑细胞污染需要清除细菌，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml，链霉素为100ug/ml。

培养基保存：

将配置后的完全培养基2-8℃条件下，避光保存备用；或按照使用需求分装入对应规格的PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中。隔夜或1-2天后观察完全培养基，溶液澄清通透且无染菌，方可使用。

使用多余的血清，按照剩余量，可分装入15mL/50mL的无菌离心管[NEST]中（防止血清冻存后膨胀泄露问题，离心管工作体积建议为80%），亦可分装入合适规格的PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中，并用封口膜封口，-20℃条件下避光保存。

使用到的NEST产品：

15mL、50mL无菌离心管[NEST]            PET/PETG方形试剂瓶[NEST]

盒装无菌吸头[NEST]                            血清移液管[NEST]

杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]          针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]                    

苏州阿尔法生物实验器材有限公司成立于2008年，位于苏州园区生物纳米园（Biobay）A5幢301室。公司管理团队专注于科学仪器行业十八年，拥有专业的技术团队与完善的售后服务体系，目前已为300余家实验室提供优质产品和服务，涵盖各大高校、检测中心、科研机构、制药企业等13个群体。提供的实验室仪器主要包括振荡培养箱，恒温恒湿培养箱、二氧化碳培养箱、生化培养箱、霉菌培养箱、PCR仪，瑞宁移液器，生物反应器，发酵罐，超低温冰箱，液氮罐，高压灭菌器，超纯水机，天平，离心机，离心浓缩仪、研磨机、葡萄糖乳酸分析仪等。厂商企业授权包括梅特勒-瑞宁Rainin 、知楚&搏旅、海尔 、杭州朗基、上海天能胶成像仪、恒尔离心机,杭州奥盛、EKF葡萄糖乳酸分析仪、小鳄Gator 、耐思NEST、天根、 海星、哈爵雅消毒液等厂家；进口品牌包括：Thermo、METTLER TOLEDO、Eppendorf、PerkinElmer、Beckman、Merk Millipore、Agilent、BMG、Tecan、Sartorius等。