在分子生物学实验中，高保真 PCR 技术是基因克隆、突变分析等精准实验的核心支撑，而 Pfu DNA 聚合酶凭借其独特的酶学特性，成为高保真 PCR 体系中的关键工具。然而，由于其与常规 Taq DNA 聚合酶在活性机制、反应需求上存在显著差异，科研人员在实际应用中常面临操作规范、产物处理、体系优化等方面的疑问。本文针对 Pfu DNA 聚合酶应用中的核心 FAQ，结合酶学原理与实验实践，提供系统性解答，助力科研人员高效解决实验难题。

该策略的核心目的是抑制 Pfu DNA 聚合酶的 3'-5' 外切酶活性对引物的降解。冰浴环境可显著降低酶的活性，避免在体系配制过程中，酶与引物提前发生作用导致引物降解；而热启动操作（60-65℃时加入酶或直接将体系放入 95℃预热的 PCR 仪）能快速将体系带入高温变性阶段，使模板 DNA 解链的同时，进一步阻断酶对引物的非特异性降解，从根本上保障 PCR 扩增的效率与特异性。

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