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PCR 实验优化实战:从引物设计到添加剂应用
作者: 苏州阿尔法生物 编辑: PCR实验优化 来源: PCR实验优化与污染防控全解析 发布日期: 2025.03.27
信息摘要:
PCR 实验优化实战:基于 LAMP 与常规 PCR 的对比研究。本文通过实验数据对比,解析不同技术路线的特异性差异,提供引物设计与反应体系…

标题:PCR 实验优化实战:基于 LAMP 与常规 PCR 的对比研究


摘要:本文通过实验数据对比,解析不同技术路线的特异性差异,提供引物设计与反应体系优化方案。

 在 LAMP 反应中,非特异性扩增发生率高达 28%(《Biosensors & Bioelectronics》2023),主要源于低温退火(55-65℃)引发的引物二聚体。相比之下,常规 PCR 通过以下策略提升特异性:

引物设计黄金法则

  • Tm 值:58-62℃(相差≤2℃)
  • GC 含量:40-60%
  • 3' 端避免连续 G/C(≤3 个)
  • 产物长度:100-300bp(利于电泳分离)

反应体系优化

添加物 作用机制 推荐浓度
TMAC 降低 AT 序列 Tm 值,减少错配 10-20mM
DMSO 破坏 DNA 二级结构,提升扩增效率 5-10% v/v
BSA 保护酶活性,减少抑制剂干扰 0.1-0.5mg/mL

实验验证
某科研团队在检测 EGFR 突变时,通过添加 5% DMSO 并优化引物,使非特异性条带减少 70%,扩增效率提升 2 倍。

PCR仪反应步骤



苏州阿尔法生物实验器材有限公司成立于2008年,位于苏州园区生物纳米园(Biobay)A5幢301室。公司管理团队专注于科学仪器行业十四年,拥有专业的技术团队与完善的售后服务体系,目前已为300余家实验室提供优质产品和服务,涵盖各大高校、检测中心、科研机构、制药企业等13个群体。提供的实验室仪器主要包括振荡培养箱,恒温恒湿培养箱、二氧化碳培养箱、生化培养箱、霉菌培养箱、PCR仪,瑞宁移液器,生物反应器,发酵罐,超低温冰箱,液氮罐,高压灭菌器,超纯水机,天平,离心机,离心浓缩仪、研磨机、葡萄糖乳酸分析仪等。厂商企业授权包括知楚仪器、朗基、中科美菱,梅特勒,乐枫,搏旅、NEST、天根、奥盛在内的80个余厂家。

四张拼图

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