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选对PCR仪,你Get到这些点了吗?

作者: 编辑: 来源: 发布日期: 2020.10.16
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阿尔法小编告诉大家无论是选择国产还是进口的PCR仪,首先要从仪器光学检测的技术方案来着手,因为这是PCR仪的核心技术,它决定了实验的准确性、…

阿尔法小编告诉大家无论是选择国产还是进口的PCR仪,首先要从仪器光学检测的技术方案来着手,因为这是PCR仪的核心技术,它决定了实验的准确性、可靠性和重复性。

一、采用顶部检测CCD技术

目前来看,顶部检测CCD技术是定量PCR仪的技术方案。国内赢领的PCR仪和国外流行的PCR仪都采用这种技术,国内有朗基的Q1000/Q2000系列产品。这种顶部检测技术采用相机原理,直接从PCR管的上方对样品进行实时检测,采光面平行性好,采光面积大,因此小体积反应液都能放心使用(如图1)。

众所周知,采用顶部检测技术的PCR仪所需要的反应体积只需5-10ul即可,(而其他检测方案的PCR仪至少需要20ul以上),从而很大程度地降低了实验成本。实验达人们清楚PCR试剂有多贵了,能省一半的试剂就是省下大把的银子啊。

图1--10ul,2倍稀释4个重复

图1 10ul,2倍稀释4个重复

二、能用0.1ml白管

经常做实验的小伙伴知道,传统定性PCR仪常用0.2ml透明管,所以使用0.2ml透明管成了一种习惯。但是对于定量PCR仪来说,0.2ml透明管绝不是合适的选择。因为样品井无法保证始终如一的干净,透明管也不能控制光不折射。

这里小编要告诉你一个获得结果的诀窍——就是改变习惯,使用白管。因为不透明的白管能屏蔽背景噪音,即使样品有点脏都没有关系。另外,白管还能减少光的折射损失,信噪比和灵敏度更高,因此可获得比透明管更佳的实验效果。顶部检测CCD方案配置白管,可实现1+1>2的优势。

图2--PCR专用0.1白管

图2 PCR专用0.1白管

另外,0.1ml管由于光程比0.2ml管更短,因而荧光信号更稳定,灵敏度更高。国内PCR仪朗基科仪就是采用SSLP短光程静态荧光CCD成像技术,巧妙地将顶部检测的光程缩小到100mm,既可使用白管,又适用0.1ml管。这项创新技术使得朗基Q2000型96孔荧光定量PCR仪的体积更是做到了进口同类产品的一半甚至更小,大大节约了实验室空间。

三、升降温速率越快越好

无论是普通pcr仪还是荧光定量pcr仪,升降温速率都决定了实验所需的时间,当然是越快越好咯。能快速达到目标温度,从而缩短实验时间和提高工作效率肯定是一台好的PCR仪应具备的品质。而对于PCR仪的变温速率来说,每秒增加1度都是半导体技术的一次进步。

四、通量越大越好

仪器的通量,包括孔数和通道数。目前市场上有8孔、16孔、48孔、96孔,还有384孔,通道数有二通道、四通道、五通道和六通道可以选择。那我们应该怎么选呢?!

买产品并不只为当下需要,更多的要考虑未来,当然是孔数越多越好,通道数越多越好。无论是科学研究还是诊断,都会越来越多地使用高通量荧光定量PCR仪。需要注意的是,有些进口厂家的仪器只对自家生产的多通道染料开放,所以有较大的局限性,选择时需谨慎。

五、软件功能越多越好

要说硬件是骨,软件就是血肉灵魂。好的软件不仅赋予仪器齐全的功能、简便的操作,还能带来美好的客户体验和完善的实验结果。相对定量、熔解曲线、基因分型(SNPs)和阴阳性判定这些都是PCR软件必不可少的功能,如果有HRM和统计学分析模式功能那就更好了。

在了解完这几点之后,小伙伴们应该心中自有一本谱了吧?小编希望各位都能买到一台称心如意的PCR仪。

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