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蛋白定量的常用方法之一BCA蛋白定量

作者: 编辑: 来源: 发布日期: 2021.04.15
信息摘要:
 BCA蛋白定量法是蛋白定量实验中常用的测定方法之一,除此之外,还有Bradford法和紫外分光光度计法。苏州阿尔法生物12 年的生物仪器设…

BCA蛋白定量的方法进行蛋白定量, 保罗.史密斯团队在20 世纪年代开创的 目前已成为蛋白定量的主要实验方法。BCA蛋白定量主要分为两个步骤

一是在碱性环境下将蛋白样本中的二价铜离子转换为一价铜,也就是将CU离子作为显色剂,这样的反应过程也被成为双缩脲 (NH2-CO-NH-CO-NH2) 反应。

下面进入实验的第②环节样本中的蛋白在BCA 与铜离子的参与下进一步完成反应,形成紫红色的络合物。此时根据被还原的二价铜离子数估算蛋白质浓度的函数。用分光光度计测试562 nm波段 的吸光度。通过蛋白浓度函数、吸光度等项与BSA 蛋白标准品对比,从而推算出蛋白含量即蛋白定量

BCA蛋白定量 

(上图为: BCA蛋白定量实验步骤

我们知道在BCA蛋白定量实验中,蛋白质的肽链结构会受主要影响,还有一些螯合剂与还原剂也会影响到实验的反应过程,比如常见的 EDTA,EGTA,DTT,还有β- 基乙醇等试剂。一般要求β- 基乙醇的浓度不大于 0.001% EDTA 浓度低于 10mM 二硫苏糖醇 DTT 试剂的话需要低于 1mM. 试剂中尽量不要使用 EGTA 强螯合剂。实践证明, BCA实验法中低浓度的盐酸胍等变性剂和 NP-40 等去污剂不会对BCA法的蛋白定量有太大影响,实验中可以初步忽略其干扰力。

 BCA蛋白定量法是蛋白定量实验中常用的测定方法之一,除此之外,还有Bradford 法和紫外分光光度计法。苏州阿尔法生物 12 年的生物仪器设备与耗材的行业经验,主要经营的实验室试剂包括干细胞培养、凝胶成像、 pcr 检测、 ECL 发光、干细胞培养、蛋白定量 等相关系列产品

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