细胞支原体污染的原因

对于生物实验器材细胞培养来说，如何预防细胞的支原体污染是每一个细胞培养者的都会考虑的问题，据统计，在细胞污染原因分析中有超过 60% 的细胞培养物污染都是由支原体所引起的。那么细胞支原体污染的原因有哪些呢？

细胞支原体污染的原因主要包括：
1. 不良操作：如操作者未穿实验服、未戴口罩、未熏蒸操作台等，容易引起污染。
 支原体一般通过难以追踪的各种来源进入细胞培养物。其中包括实验室人员、血清、细胞培养基、水浴锅、振荡培养箱、生物反应器、细胞培养瓶等。人为污染是上述污染源中最大的污染源。污染物可以通过脏衣服、实验室服装、人在层流气流附近的讲话、人的头皮、打喷嚏、咳嗽等传播。此外，无论细胞培养物在哪里，人员不断流入都会增加污染的风险。

2. 设备污染：如使用不洁净的实验工具，容易引起污染。
支原体可以通过交叉污染和不良的实验室技术从这些来源传播。这些措施包括对多个细胞系重复使用移液器，而不是使用一次性移液器或重复使用手套。

3. 实验环境污染：如使用不洁净的实验室，容易引起污染。
在层流气流中工作时（说话或移液时）产生的气溶胶也是造成污染的主要原因之一。如果细胞系长时间暴露在空气中，产生的这些气溶胶将在传代过程中进入培养基或从空气中进入。气溶胶是肉眼看不见的，因此在导致污染之前无法检测到。

4. 细胞容易污染：如不洁净的培养基、不洁净的细胞源、生物实验器材等，容易引起污染。

   培养基和血清也是细胞支原体污染的主要来源，培养基主要有液体培养基和粉末培养基两种。受技术条件影响，一般支原体也会通过粉末培养基进行传播。支原体的直径一般在0.1微米左右，而我们平时使用的除菌过滤一般孔径为0.22微米，这种孔径的过滤器只能起到过滤细菌的作用，多数支原体是不能过滤被过滤的。此外，组织培养基多数都含有指示剂，这些指示剂会因微生物污染导致 pH 值降低而变黄。所以通过观察培养基颜色的或PH值的变化也可以判断是否有支原体污染。

     血清也是支原体污染的主要来源。通过肉眼观察，在血清中较难发现支原体污染。但是对于科研实验室来说，由于细胞培养规模较小，一瓶胎牛血清往往可以培养多代细胞，需要反复冻融很多次，这样专业增加了支原体污染风险。还有，血清一般是在高压灭菌后才添加到培养基中的，因此无法保证血清无污染。

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