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流式细胞仪荧光结果分析的常见问题及解决方法
作者: 苏州阿尔法 编辑: 阿尔法生物 来源: 实验耗材 发布日期: 2023.07.07
信息摘要:
      流式细胞仪可同时测量多个参数,并具备高通量性能,能够快速分析数以万计的细胞,并提供详细的统计学数据。它广泛应用于免疫学、细胞生物…

      流式细胞仪是一种用于细胞分析的实验室仪器,它能够对单个细胞进行快速而精确的定量和质量分析。它主要通过将细胞悬浮液注入到仪器中,利用激光器照射细胞并检测经过细胞的光线散射和荧光信号,从而获取大量有关细胞形态、大小、复杂度、表面标记以及内部分子的信息。它可同时测量多个参数,并具备高通量性能,能够快速分析数以万计的细胞,并提供详细的统计学数据。它广泛应用于免疫学、细胞生物学、药理学、肿瘤学等领域的研究和实验中。

    然而,在分析流式细胞仪得到的荧光结果时,常常会遇到一些问题,如信号强度弱、背景高、细胞群分布异常等。本文将介绍常见问题,并提供相应的解决方法。

一、信号强度弱

1. 信号补偿不正确:检查流式细胞仪上的单色阳性对照是否设置正确,并确保门控和补偿设置正确。

2. 用于检测的抗体不足:增加抗体的量或浓度。

二、荧光强度高

1. 抗体浓度过高:减少每个样本中添加的抗体量。

2. 过量抗体被捕获:洗涤步骤要充分,并在洗涤缓冲液中加入吐温或Triton,以保持细胞的透化作用。

3. 封闭不足:在抗体混合液中加入1%-3%的封闭剂,并增加封闭步骤。

三、背景高/阳性细胞百分比高

1. 增益设置过高/补偿过低:使用阳性对照正确设置流式细胞仪,并使用补偿减少小颗粒背景信号和降低增益。

2. 抗体过量:降低抗体的浓度,并在洗涤缓冲液中加入去污剂,确保洗去过量的抗体。

四、在应该只有一个细胞群的情况下观察到两个或多个细胞群

1. 表达靶蛋白的细胞群不止一个:检查样本中包含的细胞类型预期的蛋白表达水平,并确保细胞充分分离。

2. 出现细胞双峰:细胞双峰显示为第二大细胞群,其荧光强度大约是单细胞荧光强度的两倍。在染色前用移液枪将细胞轻柔混匀,并在细胞仪中运行之前再次混匀。

五、侧向散射背景偏高(来自小颗粒)

1. 细胞裂解:确保样本中的细胞没有裂解和破碎,样本应新鲜并正确制备,避免高速离心或激烈涡旋的操作。

2. 细菌污染:确保样本不受细菌污染,细菌会自动发出较弱的荧光,导致高事件率。

六、低事件率

1. 每毫升的细胞数过少:将细胞稀释至1×105至1×106个细胞/mL,确保细胞均匀混合。

2. 细胞聚集阻塞管道:在染色前轻柔吹打几次,确保得到同源单细胞悬液,也可以筛选或过滤细胞,去除团块。

七、高事件率

1. 细胞数量过多:稀释样本至1×105至1×106个细胞/mL。

   通过以上问题及解决方法,我们可以更好地分析流式细胞仪得到的荧光结果。然而,需要注意的是,不同实验条件可能会导致不同的问题和解决方法。因此,根据实际情况,选择合适的解决方案是很重要的。同时,定期检查和维护流式细胞仪,以确保其正常运行,也是避免问题发生的重要措施。     

      苏州阿尔法生物提供的进口 GuavaregMuereg细胞分析仪, ImageStream®X MkII成像 流式细胞分析仪是将流式 细胞仪的高检测速度、高灵敏度以及表型分析能力与显微镜的高分辨图像及功能性研究完美结合。ImageStreamX MkII系统属于台式多色成像 流式 细胞仪,可采集多达12个通道的细胞图像。



苏州阿尔法生物实验器材有限公司成立于2008年,位于苏州园区生物纳米园(Biobay)A5幢301室。公司管理团队专注于科学仪器行业十四年,拥有专业的技术团队与完善的售后服务体系,目前已为300余家实验室提供优质产品和服务,涵盖各大高校、检测中心、科研机构、制药企业等13个群体。提供的实验室仪器主要包括振荡培养箱,恒温恒湿培养箱、二氧化碳培养箱、生化培养箱、霉菌培养箱、PCR仪,瑞宁移液器,生物反应器,发酵罐,超低温冰箱,液氮罐,高压灭菌器,超纯水机,天平,离心机,离心浓缩仪、研磨机、葡萄糖乳酸分析仪等。厂商企业授权包括知楚仪器、朗基、中科美菱,梅特勒,乐枫,搏旅、NEST、天根、奥盛在内的80个余厂家。

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