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在生物反应器中进行HEK293细胞培养的注意事项?

作者: 苏州阿尔法 编辑: 苏州阿尔法生物 来源: 发布日期: 2021.06.22
信息摘要:
293细胞系作为常用的表达外源基因的细胞株,由于具有容易转染,生产速度快,瞬时表达力强等优势,生物制药企业通常利用HEK293细胞株在微载体…

293细胞系作为常用的表达外源基因的细胞株,由于具有容易转染,生产速度快,瞬时表达力强等优势,生物制药企业通常利用HEK293细胞株在微载体生物反应器中规模化生产抗体类药物。

生物制药领域用HEK293细胞生产抗体药物虽具有较多优势,但也存在缺陷,此类细胞无论是表达 E1A蛋白的HEK293A 系列还是慢病毒HEK 293FT细胞都存在着细胞贴壁性弱,产出率低的致命缺陷。

细胞培养

这就要求我们在培养HEK293细胞时严格遵相关的操作规程。在生物反应器中培养HEK293细胞系,有以下几个方面需要注意:

一、选择合适的培养基和补料

培养基是进行细胞培养的基础营养物质,HEK293原代细胞主要来源于人胚肾细胞其形态类似于上皮细胞,所选用的培养基一般为MEM等动物细胞培养基。OPM-CD Trans293培养基由于不含生长因子和蛋白质也是不错的选择。OPM-293 ProFeed补料也有提高转染产物表达效果的作用,可与OPM-CD Trans293培养基配合使用。合适的培养基、补料是保持393细胞良好生长的必要条件。

二、细胞转染效率

细胞转染后的阳性细胞比例不仅决定着细胞的转染效率同时也决定着抗体的产能,所以提高转染后的阳性细胞比例是HEK293细胞细胞培养的关键。细胞转染前要保证传代细胞95%以上的存活率,传代频率大概控制在 3d/天,传代细胞密度一般维持在3~4×10^6 cells/ mL左右转染时可用新鲜的培养基稀释到合适的细胞密度有利于提升细胞转染效率。

三、细胞生长的环境条件

细胞培养过程中,细胞内毒素会严重阻碍细胞生长,甚至造成细胞凋亡,作业过程中设法减少转染载体溶液内毒素残留是提高细胞存活率,加快细胞生长速度的重要手段之一。 另外,在细胞表达时通过生物反应器温度控制系统调整适宜的培养温度,也有益于增加转化产物,从而提高细胞产物的总产量。

 

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