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Lip 3000脂质体转染试剂与Lipofectamine2000的区别是什么
作者: 苏州阿尔法生物 编辑: 阿尔法生物 来源: 苏州阿尔法 发布日期: 2022.07.11
信息摘要:
Lipofectamine 3000简称LIP3000采用了脂质体纳米微粒技术,提供了出众的转染性能和可重复的结果。它适用于各种难以转染的细…

Lipofectamine 3000简称LIP3000采用了脂质体纳米微粒技术,提供了出众的转染性能和可重复的结果。它适用于各种难以转染的细胞和常见的细胞,在保证转染效率的同时也提高了细胞存活率。 Lipofectamine 3000试剂可以将难转染细胞系的转染效率提升10倍左右,同时还可以降低细胞的死亡率。

lip3000转染

   另外,LIP 3000还具有多功能性,在某些情况下,它甚至可以取代电穿孔,由于提升了转染后细胞的存活率,从而也简化了工作流程。尽管Lipofectamine 2000十分受欢迎,但对于某些敏感的细胞,依然存在细胞毒性。为此,在Lipofectamine 3000的开发过程中,科学家们优化了转染过程的四个步骤,并结合了先进的脂质体纳米微粒技术。所以,Lipofectamine 3000减少了试剂的用量,并降低潜在的毒性风险。

lip300转染试剂和lip2000转染试剂

LIP3000LIP2000的区别是什么?转染效率如何?

    通过科学家使用这两种试剂来转染来自各种组织的癌细胞。研究结果证实,Lipofectamine 3000试剂的转染性能高于lip2000。使用Lipofectamine 2000,只有25%的癌细胞系被认为是容易转染的(转染效率高于50%),而使用Lipofectamine 3000,这个比例高达60%。 

此外,Lipofectamine 3000还促进了新的技术,如当下流行的基因组编辑。GeneArt TALs和CRISPR靶定了HepG2和U2OS细胞中的AAVS1位点。采用新的转染试剂后,研究人员发现转染效率、平均荧光强度和基因组切割改善。这些进步可实现更轻松的干细胞操作,增强转基因的位点特异性插入。

什么是脂质体?
 脂质体脂质体是类似于细胞膜的具有高亲和力的囊泡,将DNA放入其中(准确地说,DNA包裹在脂质体中)并导入细胞。大多数脂质体是脂质和亚精胺衍生物结合的类型。我尝试了 Lipofectamin、Lipofectamin2000、Lip3000、Tlansfectine、Tlansfectum、DMRIEC、SuparFect、Fugen6、Tf-x、Do-fecto,将 Lipofectamin 与试剂结合使用。现在可以转染大多数贴壁细胞系。

LIP300转染试剂
脂质体的制备和转染过程:
 待转染的细胞应在前一天接种。具体转染步骤如下:
1. 1. 向 Opti-MEM50ul 中加入 DNA 溶液(1ug;即使在引入多个质粒时也总共 1ug)并混合。
2. 2. 将 Plus Regent (4ul) 添加到 opti-MEM50ul 中并与 1 混合。静置15分钟。在此期间,将细胞更换为无血清培养基(不包括抗生素)。
3. 3. 将 Lipofectoamine (2ul) 添加到 opti-MEM100ul 中并与 2 混合。静置15分钟。用显微镜强烈放大时可以观察到细颗粒。
4. 用新的 600 ul 无血清培养基更换细胞培养基。3. 3. 添加脂质体并缓慢混合。
5. 2-4 小时后(2 小时即可)加入 800 ul 20% 血清培养基。
6. 再过 2-4 小时后,用 10% 血清培养基(不含抗生素)更换培养基。
(换液隔天重新电镀)
细胞转染时的注意事项:
 尽量使用聚苯乙烯设备(48孔板方便)。DNA 在小量制备水平上的纯化程度较低。将其与 maxi 一起使用并与 CsCl 结合,或通过用苯酚/氯仿提取 minipresed DNA 并用 EtOH 沉淀来使用它。

2. 或者,如果在步骤 3 中形成了大的团块,那是由于 DNA 纯化程度低。如果在转染后的第二天观察到真菌污染,则主要认为是从质粒 DNA 或其管中携带的。更换10%血清培养基(不含抗生素)后,细胞在4小时左右即可恢复,因此可通过更换10%血清培养基(含抗生素)来防止污染。 

3. 通常在转染后24 至 72 小时观察到转基因的表达。
 4.正常情况下峰值为48小时,但当细胞瞬时表达且细胞增殖能力高时,表达水平会相对低于24小时。在报告基因检测中,转染后的第二天,需要将48孔板稀释1/3至2/3倍并重新铺展,贴壁培养。正常的核受体配体反应在大约 8 到 12 小时内诱导报告产物。

       苏州阿尔法生物实验器材有限公司十三年专注于生物实验室仪器设备及实验试剂耗材的供应商,主要供应的生物试剂包括 细胞转染试剂、Lipofectamine 2000、LIP3000 转染试剂盒、天根试剂盒、碧云天试剂等细胞学、分子生物学、生命科学相关的试剂及耗材,另外提供生物反应器、发酵罐、振荡培养箱、移液器、离心机、显微镜、纯水机等实验室设备,更多转染试剂相关问题 0512-62956104联系。

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