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多克隆抗体和单克隆抗体之间的主要区别及应用
信息摘要:
多克隆抗体和单克隆抗体之间的主要区别及应用有哪些?什么是单克隆抗体?单抗和双抗有什么区别?

多克隆抗体和单克隆抗体之间的主要区别及应用

什么是单克隆抗体

单克隆抗体定义:

与靶抗原上的特定表位结合的一种(单一)抗体构成单克隆抗体。

单克隆抗体生产

为了产生单克隆抗体,是将免疫原注射到宿主动物中。一旦免疫原引起免疫反应,脾脏中的 B 细胞就会被提取出来并与骨髓瘤细胞(癌细胞 B 细胞)融合。

健康的脾细胞不会在细胞培养中无限期地存活,因此进行此融合过程以制造永生细胞系。通过该过程产生杂交瘤细胞系。

通过将脾脏中的单个 B 细胞融合并培养到它们自己的杂交瘤中,产生了所有产生相同特异性抗体的 B 细胞的单一培养物。

B 细胞将单克隆抗体分泌到细胞培养基中。在这里,它们被提取出来进行进一步的测试和纯化。

单克隆抗体杂交瘤克隆的产生提供了稳定的可再生抗体来源,确保每批与前一批相同。

为了产生一种分泌富含抗体的液体(称为腹水)的肿瘤,也可以将杂交瘤注射到小鼠的腹腔中。

单克隆抗体的用途:

  • 检测特定抗原
  • 检测蛋白质家族的单个成员
  • 在实验/批次之间创建一致的结果
  • 对背景较少的细胞进行染色——非常适合免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光实验
  • 量化蛋白质表达(例如流式细胞术或荧光激活细胞分选)
  • 检测分子构象的变化
  • 检测磷酸化状态的变化
  • 检测 X 射线晶体学的目标
  • 创建缺少特定细胞类型的动物模型
  • 免疫疗法

单克隆抗体不适用于

  • 基于同源性检测跨物种的靶蛋白
  • 检测低水平的目标蛋白
  • 检测构象改变的蛋白质

多克隆

单克隆

具有不同抗原互补位的异质抗体群

具有一个互补位的特异性抗体的同源群体

非表位特异性

表位特异性

与相似抗原发生交叉反应的可能性增加

低交叉反应性

背景噪音的可能性增加

低背景噪音

批次变异性

相同的批次

开发成本低

开发成本高

快速生产(约 3 个月)

生产缓慢(约 6 个月)

许多宿主物种选择

很少有宿主物种选择

什么是多克隆抗体?

多克隆抗体定义:

与靶抗原上许多不同表位结合的许多(多)不同抗体构成多克隆抗体。

多克隆抗体生产

将免疫原注射到宿主动物体内以产生多克隆抗体。动物中的免疫反应是由这种免疫原激活多个 B 细胞引起的,所有这些 B 细胞都针对免疫原上的特定表位。

大量具有不同互补位的抗体由此产生,因此对靶蛋白的亲和力不同。

 免疫后,可以直接从血清(去除凝血蛋白和红细胞的血液)中使用这些多克隆抗体,或者将它们纯化以获得不含其他血清蛋白的溶液。

必须用抗原对新动物进行免疫以创建新批次,这意味着批次之间存在高度的可变性。

多克隆抗体的用途:

  • 检测具有高抗原同源性的已知或未知抗原亚型
  • 检测低水平的特定抗原
  • 尽可能多地捕获抗原(例如免疫沉淀或染色质免疫沉淀)
  • 检测变性蛋白质
  • 检测具有可能的遗传多态性、糖基化或构象变化的靶标
  • 跨多种检测类型检测天然蛋白质
  • 在不同 pH 值和盐浓度的溶液中检测目标

多克隆抗体不适用以下领域

  • 定量实验,例如流式细胞仪,由于多个结合位点导致信号放大,会导致不正确的结果
  • 与高同源蛋白存在交叉反应问题的情况
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