多克隆抗体和单克隆抗体之间的主要区别及应用

什么是单克隆抗体？

单克隆抗体定义：

与靶抗原上的特定表位结合的一种（单一）抗体构成单克隆抗体。

单克隆抗体生产

为了产生单克隆抗体，是将免疫原注射到宿主动物中。一旦免疫原引起免疫反应，脾脏中的 B 细胞就会被提取出来并与骨髓瘤细胞（癌细胞 B 细胞）融合。

健康的脾细胞不会在细胞培养中无限期地存活，因此进行此融合过程以制造永生细胞系。通过该过程产生杂交瘤细胞系。

通过将脾脏中的单个 B 细胞融合并培养到它们自己的杂交瘤中，产生了所有产生相同特异性抗体的 B 细胞的单一培养物。

B 细胞将单克隆抗体分泌到细胞培养基中。在这里，它们被提取出来进行进一步的测试和纯化。

单克隆抗体杂交瘤克隆的产生提供了稳定的可再生抗体来源，确保每批与前一批相同。

为了产生一种分泌富含抗体的液体（称为腹水）的肿瘤，也可以将杂交瘤注射到小鼠的腹腔中。

单克隆抗体的用途：

• 检测特定抗原
• 检测蛋白质家族的单个成员
• 在实验/批次之间创建一致的结果
• 对背景较少的细胞进行染色——非常适合免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光实验
• 量化蛋白质表达（例如流式细胞术或荧光激活细胞分选）
• 检测分子构象的变化
• 检测磷酸化状态的变化
• 检测 X 射线晶体学的目标
• 创建缺少特定细胞类型的动物模型
• 免疫疗法

单克隆抗体不适用于：

• 基于同源性检测跨物种的靶蛋白
• 检测低水平的目标蛋白
• 检测构象改变的蛋白质

什么是多克隆抗体？

多克隆抗体定义：

与靶抗原上许多不同表位结合的许多（多）不同抗体构成多克隆抗体。

多克隆抗体生产

将免疫原注射到宿主动物体内以产生多克隆抗体。动物中的免疫反应是由这种免疫原激活多个 B 细胞引起的，所有这些 B 细胞都针对免疫原上的特定表位。

大量具有不同互补位的抗体由此产生，因此对靶蛋白的亲和力不同。

 免疫后，可以直接从血清（去除凝血蛋白和红细胞的血液）中使用这些多克隆抗体，或者将它们纯化以获得不含其他血清蛋白的溶液。

必须用抗原对新动物进行免疫以创建新批次，这意味着批次之间存在高度的可变性。

多克隆抗体的用途：

• 检测具有高抗原同源性的已知或未知抗原亚型
• 检测低水平的特定抗原
• 尽可能多地捕获抗原（例如免疫沉淀或染色质免疫沉淀）
• 检测变性蛋白质
• 检测具有可能的遗传多态性、糖基化或构象变化的靶标
• 跨多种检测类型检测天然蛋白质
• 在不同 pH 值和盐浓度的溶液中检测目标

多克隆抗体不适用于以下领域：

• 定量实验，例如流式细胞仪，由于多个结合位点导致信号放大，会导致不正确的结果
• 与高同源蛋白存在交叉反应问题的情况

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