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基因编辑里最难量化的一环-用分子互作分析仪测 Cas9 RNP 与靶 DNA 的结合动力学

  用分子互作分析仪测Cas9RNP与靶DNA的结合动力学关键在于 Cas9与靶DNA的结合难量化,卡点不在"结不结合",而在解离慢——文献报道其复合物寿命在小时量级,解离速率约5.0×10⁻⁵s⁻¹。要在天然条件下拿到KD、ka、kd三个值,关键是把解离段拉长(已有实验用到3600秒),并用PAM突变与非互补序列做对照;分子互作分析仪的实时、无标记特性正好匹配这类需求,通道数则可按候选规模在4到32通道之间选。