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天根 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 增强型-DP219

天根 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 增强型-DP219

 • 快速:整个操作过程快速方便,十几分钟即可完成回收工作。

 • 便捷:无需平衡液,室温溶胶。 

 • 高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可以大量回收到高纯度的目的DNA。

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天根琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 增强型-DP219

目录号 规格
DP219-02 50次
DP219-03 200次
产品简介
本试剂盒采用可以高效率结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或 TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷 酸引物等杂质,回收100 bp-15 kb DNA片段,回收率高达80%,每个离心吸附柱每次可吸附 的DNA量为10 μg。 
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、 连接和转化等实验。
产品特点

• 快速:整个操作过程快速方便,十几分钟即可完成回收工作。

• 便捷:无需平衡液,室温溶胶。

• 高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可以大量回收到高纯度的目的DNA。

下游应用

使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

天根-琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(增强型)(离心柱型) DP 219使用说明【点击进入下载中心】

储存条件

            ( 1 5 - 3 0  )          1 2         

淀 , 使 用 前 可 在 3 7 ℃ 水 浴 中 预 热 1 0 m i n 以 溶 解 沉 淀 , 不 影 响 效 果 。

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。  

1. 电泳时请使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。

2. 如下一步实验要求较高,则应尽量使用TAE电泳缓冲液。

3. 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

4. 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。

5. 如果回收率较低,可在胶充分溶解后检测pH值,如pH值大于7.5,可向含有DNA的胶溶 液中加10-30μl3 M醋酸钠(pH5.2)将pH值调到5-7之间。

6. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。 

   

使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1. 将单  的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管

中,称取重量。

注意:使用切胶器(OSE-GC)切胶时,切胶器口对准琼脂糖凝胶中DNA条带下压切割。切胶完成后,推动中心杆,将胶块推入干净的离心管中。根据凝胶胶孔宽度可进行单次切割和连续切割。

2. 向胶块中加入3倍体积溶胶液PE(如果凝胶重为0.1 g,其体积可视为100 μl,则加入300 μ溶胶液PE。使用切胶器切割1%的琼脂糖凝胶,单块重量约为0.06 g,实际胶块重量与 凝胶浓度及厚度相关),室温15-25℃溶胶5-10 min,其间不断温和地上下翻转离心管,

以确保胶块充分溶解。 若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。  

注意:对于大于5 kb以上的大片段或者是胶浓度大于1.5%的情况下,建议50℃加热溶胶 5-10 min;胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。

3. 将上 一 步所得溶液加入 一个吸附柱CA5中(吸附柱放入收集管中),室温放置2 min, 12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CA5放入收集

管中。

注意:吸附柱容积为800 μl,若样品体积大于800 μl可分批加入。

4. 向吸附柱CA5中加入600 μl漂洗液PW 使用前请先检查是否已加入无水乙醇),  12,000

rpm(~13,400×g)离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CA5放入收集管中。

注意:如果回收的DNA是用于盐敏感的实验,例如平末端连接实验或直接测序,建议PW加入后静置2-5 min再离心。

5. 重复操作步骤4。

6. 将吸附柱CA5放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,尽量除尽漂洗液。 将吸附柱CA5置于室温放置数分钟,彻底地晾干,以防止残留的漂洗液影响下一步的实 验 。

注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR)实验。

7. 将吸附柱CA5放到一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液TB, 室温放置2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min收集DNA溶液。

注意:洗脱体积不应小于30 l,体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有  很大影响。若后续做测序,需使用ddHO做洗脱液,并保证其pH7.0-8.5范围内,pH  值低于7 .0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。DNA也可以用 缓冲液(10 mM Tris-Cl,pH8.0)洗脱。为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重  新加回离心吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,将DNA  液收集到离心管中。

D N A       

回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

DNA应在OD2so处有显著吸收峰, OD26o值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml 单链DNA。

ODzsp/OD28o比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH₂O,比值会偏 低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

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