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细胞培养过程中的常用试剂有哪些?

作者: 苏州阿尔法生物 编辑: 苏州阿尔法 来源: 发布日期: 2021.07.09
信息摘要:
细胞培养是生命科学实验的基础实验,做过细胞培养的小伙伴都知道培养过程中的常用到的生物试剂的作用吗?小编大概归纳了一下在细胞培养过程中常见试剂…


细胞培养是生命科学实验的基础实验,做过细胞培养的小伙伴都知道培养过程中的常用到的生物试剂的作用吗?小编大概归纳了一下在细胞培养过程中常见试剂的作用,以便更好地了解细胞培养实验。

一、了解培养基

虽然细胞系培养没有指定固定的培养基,但针对不同特性的细胞所选择的培养基也会有所不相同,比如贴壁培养选择MEM培养基会具有较好的贴壁效果;悬浮细胞一般采用RPMI-1640培养基生长状态旺盛;无血清培养的细胞一般会选择AIM V (12005)或SFM培养基。

培养基

根据细胞特性在培养基生产过程中常会添加一些特殊成分: 

1.  L-谷氨酰胺

 L-谷氨酰胺在细胞培养过程中主要为细胞提供能量来源,并且会参与到细胞的核酸代谢及蛋白质合成,它的缺陷在于降解时会释放氨基,对细胞会造成一定的毒性伤害。所以一些致敏细胞培养时需要注意谷氨酸钠及氨成分的含量。

2. GlutaMAX-Ⅰ

GlutaMAX-I 二肽属于谷氨酰胺的衍生品,其作用机理基本上与L-谷氨酰胺相一致,不同的是GlutaMAX-I 的结构比较稳定,降解度低,所以释放的氨基毒性物质也较少,适用于无毒性的供应能量需求。

 3.酚红指示剂

酚红作为一种化学指示剂,常用被于酸碱度PH 值的辨识。它在酸性环境下呈现显色为黄色,中型溶液时呈现红色,偏碱性环境时显示颜色为紫色。正常情况下,酚红作为指示剂,在细胞培养过程中一般不与培养物发生反应,但是对于哺乳动物动物细胞培养时,会起到类固醇激素的细胞反应,并且在细胞检测时也会对检测数据起到干扰作用。因此,一般在培养哺乳动物和打算做流式细胞检测时一般不用含酚红的培养基。

二.细胞培、检测过程中的试剂

1.台盼蓝染色与活细胞计数

普通细胞计数的方法将细胞悬浮液用无血清培养基稀释后,加入一定比例的台盼兰染色液,轻摇混匀后,用血球计数板/细胞计数板中进行人工或机器计数操作。其中未染色的细胞为活细胞,染为蓝色的细胞为死细胞。

2.抗生素的使用

为防止下的培养污染在有些细胞培养过程中也会适量添加抗生素或康霉菌素,由于这些添加剂虽能起到抑菌作用但会影响到细胞的正常生长和传代,甚至出现毒杀细胞的作用。所以,添加时一定要进行细胞毒性测试并注意使用浓度。

3.丙酮酸钠的添加

丙酮酸钠在细胞培养过程中一般会作为葡萄糖的替代品为细胞生长提供充足的碳源,可根据细胞生长状况添加,有的也会配备好添加在培养基中。

4.平衡盐溶液、缓冲液的使用

细胞培养中常见的平衡盐主要有HBS、EBS和Eagles液。

不同缓冲液的碳酸氢钠的水平也不一致,并且缓冲液的PH也会根据培养产物及培养温度的不同而产生相应的变化,可根据实际情况选择使用。

5.培养血清的选择

细胞的培养与血清的选择也具有较大关系。一般胎牛血清由于成本昂贵一般被用于对生长环境挑剔的难以生长的细胞,比如干细胞、神经细胞等。普通的肌细胞、白细胞等选择普通的新生牛血清即可。

胎牛血清


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