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生物反应器-悬浮细胞培养-细胞培养基-配比方案
作者: 苏州阿尔法生物 编辑: 苏州阿尔法 来源: 苏州阿尔法生物官网 发布日期: 2021.09.23
信息摘要:
一种适合生物反应器悬浮培养细胞培养的培养基配比方案。

适合生物反应器悬浮细胞培的细胞培养基配比方案

标签:细胞培养 培养基 悬浮培养 细胞 生物反应器 缓冲液

培养基是生物细胞进行体外培养的重要营养基质。动物细胞在生物反应器中进行细胞培养时主要采用悬浮培养方式,用于悬浮培养的培养基主要有以下几种:

一、平衡盐溶液:

平衡盐溶液简称BSS,它在细胞培养过程中主要为细胞提供微量的无机盐,起调节培养基的PH、维持渗透压平衡等作用。常用来作为洗涤液或配置稀释培养基使用。实验中常用的平衡盐溶液有NaCl溶液,HanksEarles平衡盐,PBS缓冲液等。

一般情况下,配制细胞消化液或者洗涤细胞时会采用HanksPBS,因为这两种溶液中几乎不含钙、镁离子,可以减少细胞的粘附性。在密闭的培养器内进行细胞培养时,多数则采用Hanks’溶液。

几种常用的平衡盐溶液配置方案(g/L)

名称

无Ca2+Mg2+PBS

含Ca2+Mg2+PBS

Earle’s

Hanks’

D-Hanks’

aCl

8.00

8.00

6.80

8.00

8.00

KCl

0.20

0.20

0.40

0.40

0.40

CaCl2

-

-

0.20

0.14

-

MgCl26H2O

-

0.1

-

-

-

MgSO47H2O

-

-

0.20

0.20

-

Na2HPO4

1.15

1.15

-

0.048

0.048

NaH2PO42H2O

-

-

0.14

-

-

KH2PO4

0.20

0.20

-

0.06

0.06

NaHCO3

-

-

2.20

0.35

0.35

葡萄糖

-

-

1.00

1.00

-

酚红

-

 

0.01

0.01

0.01

二、动物体液、动物组织提取液

这类培养基主要包含血清、淋巴液、水解蛋白等。其中血清和水解乳蛋白是实验中使用较多的培养基添加剂,同时也是细胞培养基中的主要营养成分,常使用的血清主要有胎牛血清和新生牛血清。虽然血清的营养成分较高,但是由于其内部成分较为复杂,容易导致下游产物的分离、纯化工序繁琐。所以市场上逐渐出现合成型培养基,比如MEMDMEMPRMI1640.

 

三、合成细胞培养基

合成细胞培养基是根据血液及细胞组成成分的研究,确定营养配比,将细胞生长所需要的微生物、氨基酸、微量元素及平衡盐溶液等安一定比例配比所研发出的营养组合型培养基。此类培养基广泛适用于培养瓶、摇瓶细胞培养器和生物反应器等实验设备中。常用合成型细胞培养基配方可参考下表:

合成细胞培养基的配比表(mg/L)

成份(mg/L)

BEM

DMEM

DMEM/F12

199

MEM

RPMI1640

四水硝酸钙

-

-

-

-

-

100

氯化钙

200

200

116.6

200

200

-

硫酸铜

-

-

0.0013

-

-

-

九水合硝酸铁

-

0.1

0.05

0.70

-

-

七水合硫酸亚铁

-

-

0.417

-

-

-

氯化钾

400

400

311.8

400

400

400

六水合氯化镁

-

-

28.64

-

-

-

无水硫酸镁

97.67

97.67

48.84

97.67

97.67

48.84

氯化钠

6800

6400

6999.5

6800

6800

6000

H2NaO4P

121.7

108.7

54.35

121.74

121.74

-

Na2HPO4

-

-

71.02

-

-

800

七水合硫酸锌

-

0.432

-

-

-

L-盐酸精氨酸

21

84

147.5

70

126

200

L-胱氨酸盐酸盐

15.65

63

31.29

26

31.29

65.15

L-谷氨酰胺

292

584

365

100

292

300

甘氨酸

-

30

18.75

50

-

10

L-盐酸组氨酸

15

42

31.48

21.88

42

15

L-异亮氨酸

26

105

54.47

40

52

50

L-亮氨酸

26

105

59.05

60

52

50

L-盐酸赖氨酸

36.47

146

91.25

70

72.5

40

L-甲硫氨酸

7.5

30

17.24

15

15

15

L-苯丙氨酸

16.5

66

35.48

25

32

15

L-丝氨酸

-

42

26.25

25

-

30

L-苏氨酸

24

95

53.45

30

48

20

L-丙氨酸

-

-

4.45

25

-

-

L-谷氨酸

-

-

 

75

-

20

L-门冬酰胺

-

-

7.5

 

-

50

L-门冬氨酸

-

 

6.65

30

-

20

L-盐酸半胱氨酸

-

-

17.56

0.11

-

-

L-谷氨酸

-

-

7.35

-

-

-

L-脯氨酸

-

-

17.25

-

-

20

L-羟脯氨酸

-

-

 

10

-

20

L-色氨酸

4

16

9.02

10

10

5

L-酪氨酸

18

72

38.4

40

36

20

L-缬氨酸

23.5

94

52.85

25

46

20

腺嘌呤硫酸盐

-

-

-

10

-

-

腺苷酸

-

-

-

0.20

-

-

ADT

-

-

-

1

-

-

胆固醇

-

-

-

0.20

-

-

2-脱氧-D-核糖

-

-

-

0.50

-

-

无水葡萄糖

1000

1000

3151

1000

1000

2000

谷胱甘肽(还原型)

-

-

-

0.05

-

1

鸟嘌呤盐酸盐

-

-

-

0.30

-

-

HEPES

-

-

3574.5

-

-

-

次黄嘌呤

-

-

2

0.30

-

-

亚油酸

-

-

0.042

-

-

-

硫辛酸

-

-

0.105

-

-

-

苯酚红

10

15

8.10

20

10

5

D-核糖

-

-

-

0.50

-

-

乙酸钠

-

-

-

50

-

-

胸腺嘧啶

-

-

-

0.30

-

-

聚山梨酯80

-

-

-

20

-

-

尿嘧啶

-

-

-

0.30

-

-

黄嘌呤

-

-

-

0.30

-

-

维生素C

-

-

-

0.05

-

-

维生素E

-

-

-

0.01

-

-

1,4-丁二胺酸盐

-

-

0.081

-

-

-

丙酮酸钠

-

110

55

-

-

-

D-生物素

1

-

0.0035

0.01

-

0.2

维生素D2

-

-

-

0.10

-

-

泛酸钙

1

4

2.24

0.01

1

0.25

氯化胆碱

1

4

8.98

0.50

1

3

叶酸

1

4

2.65

0.01

1

1

肌醇

2

7.2

12.6

0.05

2

35

维生素K3

-

-

-

0.01

-

-

烟酸

-

-

-

0.025

-

-

烟酰胺

1

4

2.02

0.025

1

1

对氨基苯甲酸

-

-

-

0.05

-

1

盐酸吡哆醛

1

4

2

0.025

1

-

维生素B6

-

-

0.031

0.025

-

1

维生素B2

0.1

0.4

0.219

0.01

0.1

0.2

维生素B1

1

4

2.17

0.01

1

1

胸苷

-

-

0.365

-

-

-

维生素B12

-

-

0.68

-

-

0.005

维生素A

-

-

-

0.14

-

-

pH(无碳酸氢钠)

5.60~6.20

3.20~3.80

5.50~6.10

3.90~4.50

5.60~6.20

7.20~7.80

pH(加碳酸氢钠)

7.40~8.00

7.20~7.80

6.50~7.10

7.00~7.60

7.30~7.90

7.50~8.10

渗透压(无碳酸氢钠)

238~263

238~263

265~293

238~263

238~263

225~249

渗透压(加碳酸氢钠)

285~315

300~332

284~314

274~302

280~310

265~293

摘自北京清大天-产品目录

细胞培养

 

 介于国外生物反应器成本高昂,售后服务不便,型号固定、货期长等因素,我国自主研发设备生产的生物反应器目前已广泛应用于制药生产、新药开发、蛋白研发、转基因产品等环节,一些国内生物反应器专业生产商甚至可根据客户要求的尺寸进行定制化操作,比如搏旅除生产固定型号规格外,还可以根据客户要求定制不同级别、规格的生物反应器、发酵罐主要用于微生物培养、种子制备、浮细胞培养、贴壁细胞培养、微载体培养等,实现了厂商直供,一罐多用,满足不同的用户需求。苏州阿尔法生物13年专注于生物实验室仪器设备与实验室试剂耗材的专业供应,实验室仪器中所供应的生物反应器可用于灌流培养、固定床式培养、搅拌通气式培养、悬浮培养、贴壁培养等多种细胞培养工艺。在细胞培养 、微载体培养、微生物培养、生物制药等领域被广泛应用,同时我们还提供细胞培养基、血清、培养添加剂、细胞培养瓶、培养皿、摇瓶等细胞培养类的试剂耗材 。同时还提供提供免费的实验室设备安装服务、免费技术支持、免费操作指导等服务。如需了解更多,请0512-62956104  18934597460进行咨询。

 

 

 

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