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什么是抗体验证?抗体验证流程是什么?
作者: 阿尔法 编辑: 苏州阿尔法 来源: 阿尔法生物 发布日期: 2022.01.07
信息摘要:
抗体是生命科学研究、诊断和测试中常用的试剂之一。尽管它们被广泛使用但目前还没有标准指南来定义它们在使用前应如何进行验证。结果是许多商业抗体没…

抗体是生命科学研究、诊断和测试中常用的试剂之一。尽管它们被广泛使用但目前还没有标准指南来定义它们在使用前应如何进行验证。结果是许多商业抗体没有得到充分验证和/或无法获得实验数据。 未验证的抗体验证导致了不可重复的结果,甚至项目被放弃,造成时间、金钱和样品的巨大损失 。因此,迫切需要验证抗体并为其创建通用标准。

什么是抗体验证

抗体验证定义为以下几点:证明特异性(抗体区分不同抗原的能力),证明在将要使用的应用中的特异性,证明亲和力(抗体与表位结合的强度) ) 并最终证明可重复性。然而,虽然抗体验证的这种定义是实用的,但其广泛应用或标准化过程的实施仍然是一个重要的关注领域。

一些抗体销售公司验证了他们的产品,而其他公司根本不验证它们。之所以出现这些差异,是因为与药物不同,没有机构管理可以出售的物品。但随着市场的快速增长,质量声誉正在成为一些供应商商业计划的一部分,抗体验证现在被视为一种竞争优势。

验证抗体的责任在于供应商本身,无论他们是制造该抗体还是简单地分销它。但是,虽然供应商对其销售的试剂质量负责,但抗体性能可能会因超出其验证工作范围的原因而有所不同 。例如,抗体在运输过程中可能会发生变化,或者虽然验证可以在具有适当控制的生物相关系统中完成,但最终用户很可能会在他们自己的系统中使用它。因此,最终用户也有责任验证他们的抗体。不同的制造商已经提出了验证过程。

通过采取几个小步骤,研究人员可以在运行实验时降低风险,而无需对他们获得的抗体进行批判性思考。


抗体

抗体的验证工作流程

抗体的验证工作流程如下:

1.识别针对感兴趣蛋白质的所有商业抗体;

2.使用 PaxDB 来识别以相对高水平表达感兴趣蛋白质的细胞系并且很容易被 CRISPR/Cas9 修改;

3.生成 KO 细胞系并通过定量免疫印迹筛选抗体;

4.使用步骤 3 中确定的特异性抗体来筛选细胞系面板;

5.根据步骤 4 中的信息选择目标蛋白高表达的细胞系,可通过 CRISPR/Cas9 进行编辑,并具有目标目标的适当特征;

6. 使用选定的编辑线通过免疫沉淀和免疫荧光筛选特异性抗体;

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