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实例应用-如何计算DNA片段中的分子数?

作者: 苏州阿尔法 编辑: 阿尔法生物 来源: 苏州阿尔法生物 发布日期: 2021.12.08
信息摘要:
在定量PCR实验中,常常会遇到计算 DNA 片段中的分子、计算溶液的浓度或计算连续稀释等,这样的计算有没有什么好的方法呢?

实验室数学在生物学实验数据分析中一直是一个令人头疼的问题?在定量PCR实验中,常常会遇到计算 DNA 片段中的分子、计算溶液的浓度或计算连续稀释等,这样的计算有没有什么好的方法呢?

当然有了,在本文中,我们将教你简单的 DNA 样本中的分子计数法。

——例如,套入公式即可一招轻松拆解:500 ng 样本中有多少个 50 碱基对 (bp) 片段的模板 /副本这样的棘手问题。使您很快就会成为实验室中的计算高手!

一、计算 DNA片段中分子数量的应用

在进行以下类型的实验时,通常需要DNA分子的计算

DNA 连接

生化分析。

实时 PCR(绝对定量)。

测量载体基因组的数量。

二、分子数计算公式的原理

我们知道,单个 DNA bp 的平均重量为 650 道尔顿。这也可以写为 650 g/mol= 摩尔质量)。因此,任何双链 DNA 片段的分子量或摩尔质量都可以通过将其长度(以 bp 为单位)乘以 650来计算,答案将表示为道尔顿或 g/mol

只要我们知道序列长度(即基因组的长度/大小),此计算将适用于任何物种的基因组 DNA

三、实例与应用:

1.实例问题: 5.2-kb 质粒的分子量是多少?记住 5.2 kb = 5200 bp

计算: 5200 bp x 650 道尔顿 = 3,380,000 道尔顿或 g/mol

现在我们知道如何计算 DNA 模板的分子量了。使用阿伏伽德罗数,即 6.022 x 10 23分子/摩尔,可以使用以下公式计算每模板的分子数:

计数

2.实例问题:您有 300 ng 5.2-kb 质粒。你的质粒有多少拷贝

分数 

 

3.实例问题:您有 50 ng 20-bp 引物。你的引物有多少份?

引物份数

4.实例问题:您有 150 ng 670 bp 纯化 PCR 产物你有多少份 PCR 产物?

 

注意:此公式基于您使用的是单一 DNA 物种的假设,因此在应用于 PCR 产物或质粒时,请确保您只有 1 个条带或您有干净的质粒小量制备。

所以实验中,只要知道 DNA 片段的长度和以纳克为单位的浓度,您就可以轻松应用该公式来获得任何类型的 DNA 样本中的拷贝数。

四、其他分子量计算常用的公式

分子量计算

DNA分子量计算

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