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琼脂糖凝胶电泳实验的操作方法
作者: 编辑: 来源: 发布日期: 2021.08.24
信息摘要:
电泳  琼脂糖凝胶电泳    电泳设备    蛋白电泳  缓冲液琼脂糖凝胶电泳是鉴定核酸、蛋白分子量的常用方法,通过琼脂糖凝胶电泳实验分析,…

标签:电泳  琼脂糖凝胶电泳    电泳设备   蛋白电泳  缓冲液

琼脂糖凝胶电泳是鉴定核酸、蛋白分子量的常用方法,通过琼脂糖凝胶电泳实验分析,可以有效地识别出核酸类型及DNA片段的大小。

实验前准备:

1、琼脂糖凝胶:琼脂糖凝胶的配置浓度需要根据DNA片段长度的大小而定。具体的琼脂糖凝胶的配置浓度参考范围如下:

电泳

2、缓冲液核酸电泳缓冲液主要有 Tris-硼酸(TBE)Tris-乙酸(TAE)Tris-磷酸(TPE) 3实验中多选用TBE缓冲液,如果考虑成本因素的话也可以尝试使用TAE缓冲液。TPE缓冲液磷酸盐浓度较高,在进行DNA回收时容易形成沉淀。10XTBE缓冲液可以直接购买,也可以自行配制

10XTBE缓冲液配制方法如下:

Tris:108

EDTA: 9.3

硼酸:55

加纯水到1000ul (PH8.08.2之间) ,使用时用20倍的水稀释到0.5XTBE即可。

3指示剂的使用

指示剂:DNA电泳实验中常用的指示剂主要为溴二甲苯酚蓝和二甲苯青等。碱性环境下的溴二甲苯酚蓝呈现紫蓝色,不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速率也不相同。比如:在0.6%浓度的凝胶中的迁移率与1KB长度的DNA片段基本一致。而1%左右浓度的琼脂糖凝胶中迁移速率与0.6KB长度的双链DNA片段基本一致。

二甲苯青溶于水呈现蓝色同样在浓度不同的凝胶中二甲苯青的迁移速率也是不相同的,比如在1%琼脂糖凝胶电泳时,其迁移速率大致2Kb双链DNA接近

4.染色剂的使用

染色剂:核酸电泳后,需经染色后才能显现出带型,琼脂糖凝胶实验较为常用的是EB染色,也就是溴化乙锭染色法。根据实际实验情况,可在凝胶电泳缓冲液中加入浓度为0.5ug/ml溴化乙锭或电泳后将凝胶置入浓度为0.5ug/ml EB溶液中染色10-15分钟。即可看到条带。值的注意的是EB浓度如果过高会影响到条带的清晰度。

5. 核酸电泳设备:

核酸电泳设备主要包括电泳仪电泳槽、梳子等。

6.核酸电泳方法

1)在用纯水清洗过的电泳槽里放置好梳子

2)将稀释好的0.5xTBE缓冲液加入三角瓶中,并加入定量的琼脂粉,根据实验要求配置好对应的琼脂糖凝胶待冷却到60°C时即可加入EB。缓慢倒入电泳槽中凝固。

3)待胶凝固后,箱电泳槽中缓缓加入0.5XBE浓度的TBE,加入量以淹没胶面2MM为宜。

4)打开电源,进行电泳操作。

5)根据电泳条带进行电泳分析比对。

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